重組胰蛋白酶TrypLE ELISA試劑盒（干細胞專用）檢測原理

重組胰蛋白酶TrypLE ELISA試劑盒（干細胞專用）是一種高靈敏度、通用性的試劑盒，用于定量檢測重組類胰蛋白酶及其類似物。該試劑盒能夠對中間體、半成品和成品生物制品中殘留的重組胰蛋白酶（TrypLE）進行敏感、特異和準確的檢測。該試劑盒具有擴展的檢測范圍，為0.1-16 ng/mL，并將優化的定量限制降低至0.1 ng/mL。

艾美捷重組胰蛋白酶TrypLE ELISA試劑盒（干細胞專用）基本參數：

目錄號：A-QEK003

規格：100mL

儲存：在黑暗中2-8°C（試劑盒標簽上顯示了生產日期和保質期。）

重組胰蛋白酶TrypLE ELISA試劑盒（干細胞專用）檢測原理：

該試劑盒利用雙抗體夾心酶聯免疫吸附檢測技術檢測微量樣品中TrypLE的量。將捕獲抗體包被在96孔酶標記板上以產生固相抗體。隨后，添加標準品和試樣，然后添加辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體。這形成了固相抗體TrypLE檢測抗體三明治復合體。反應后，進行洗滌，并加入顯色基質進行著色發展在HRP的催化和停止解決方案（如下圖所示）。在450nm和630nm處測量吸光度（OD值）630nm作為參考波長。OD值與樣品中TrypLE含量呈正相關。

性能規范：

檢測限制：小于0.1 ng/mL

定量限制：0.1 ng/mL

線性范圍：0.1-16 ng/mL

準確度（回收率）：70% - 130%

準確度（測量偏差）：≤ 15%

重復性（批內變異）：≤ 10%

試劑制備：

1. 洗滌緩沖液（1×）：將洗滌緩沖液（20×）與去離子水按照1:20的比例稀釋，例如，將10 mL洗滌緩沖液（20×）與190 mL去離子水混合。注意：如果洗滌緩沖液（20×）出現結晶，輕輕搖晃室溫下或在37°C的水浴中，直到結晶完全溶解后再稀釋。

2. 底物溶液的制備：將發展溶液A和發展溶液B體積相等地混合，充分攪拌，并存放在避光條件下。注意：不要提前太久準備底物溶液。通常，在使用前的10分鐘內準備。如果混合后溶液變藍色，不要使用。

3. 標準曲線的制備：（注意：每次實驗都要準備新鮮的標準溶液）

將標準品（1 μg/mL）用樣品稀釋液稀釋至濃度為16 ng/mL，然后按照下面的圖表進行后續稀釋：

樣品制備：

將樣品平衡至室溫，并在加入測定之前將其充分混合。如果用戶需要稀釋試劑盒中提供的樣品或高濃度標準品試劑盒可用于稀釋。對于基于細胞的樣品，建議以3000rpm離心5分鐘，收集上清液，并進行測定。

程序分析：

所有操作應在室溫下進行，并建議對所有樣品孔進行重復測量。

1. 將試劑盒組分在室溫下平衡30分鐘。從已平衡至室溫的鋁箔袋中取出所需的試紙條。使用記號筆標記試紙條的順序。用板封密封剩余的試紙條，然后放回鋁箔袋中密封。將袋子密封并儲存在2-8°C的環境中。注意：在洗板過程中，試紙條可能容易脫落，因此要注意正確標記。

2. 樣品孵育：將稀釋后的標準品和測試樣品加入微孔板孔中（建議順序：標準孔、空白孔、樣品孔；以濃度梯度加入標準品）。每孔加入100 μL，用板封密封板，37°C下以500 rpm的速度搖動孵育1小時。注意：控制樣品加入時間在10分鐘內，以避免隨時間漂移。在孵育過程中，不適當的封閉或不完全封閉可能導致反應溶液蒸發并產生實驗誤差。

3. 洗板：孵育后，小心取下板封并倒掉孔中的液體。用洗滌緩沖液（1×）洗板三次（每孔250 μL），輕輕敲干以去除樣品孔中的殘余液體。注意：如果使用手工洗滌，加入洗滌緩沖液（1×）后靜置1分鐘；如果使用洗板機，加入洗滌緩沖液后輕輕搖動5秒鐘。

4. 酶標抗體孵育：向每個孔中加入酶標抗體，每孔100 μL。用板封密封板，37°C下以500 rpm的速度搖動孵育1小時。

注：每次清洗后加液前，檢查條帶是否固定，防止加液后固定條帶時濺出液體

5.洗板：同步驟3。

6.顯色：將預配置的基質溶液添加到微孔板孔中，100μL/孔。密封板

使用平板封口機，在37°C的光線保護環境中孵育15分鐘。

7.停止反應：加入停止溶液，100μL/孔。讀取均勻顯色后的吸光度。注意：讀數通常在添加停止溶液后20分鐘內完成。

8.讀取：將微孔板放入微孔板讀取器中，將雙波長設置為450/630nm，并讀取吸光度值。

注意：建議在微孔板閱讀器程序中設置5-10秒的搖動步驟。

該試劑僅用于科學研究領域，不適用于臨床診斷或其他用途。

Biogradetech生命科學和醫藥研發行業關鍵原料與試劑的供應商：Biogradetech成立于2015年，總部位于美國加利福尼亞州，早期以產品技術研發服務起家，逐步發展了廣泛的產品線，并將其商業化銷售，包括蛋白質、抗體、酶、培養基、試劑盒和儀器。適用于細胞生物學、蛋白質組學、分子生物學、免疫學、微生物學、診斷學、生物化學、神經科學、血液分析和高通量藥物篩選等領域。