操作方法丨高濃度無酚紅基質膠（體內實驗PDX/CDX 異種移植）

高濃度無酚紅基質膠（體內實驗PDX/CDX 異種移植）分別有標準高濃度和低因子高濃度，它們的粘度較高，凝膠時間較快，更適合于體內實驗（動物模型）常被應用于PDX/CDX模型建立、體內血管生成測定等。蛋白濃度：16-26 mg/mL。

基質膠是一種源自小鼠肉瘤細胞的細胞外基質構成的水凝膠，包含許多組織基底膜所有已知主要成分，包括層粘連蛋白 (~60%)、膠原蛋白 IV (~30%)、巢蛋白 (~8%) 和硫酸肝素蛋白多糖透明聚糖 (~2–3%)，以及生長因子等共計14000種多肽和1851種蛋白。

基質膠可以改善正常和轉化的貼壁依賴性上皮細胞以及其它細胞類型的附著和分化，因此是使用最為廣泛的細胞體外3D培養的支架，尤其是類器官培養。

物理性質：

可溶水凝膠，4℃為液態，37℃為半固體凝膠狀態。液態（4℃）與半固體凝膠態（37℃）可以反復轉換。

艾美捷Biogradetech高濃度無酚紅基質膠（體內實驗PDX/CDX 異種移植）

中文名稱：高濃度，無酚紅，基質膠（體內實驗，PDX/CDX 異種移植）

英文名字：HC Basement Membrane Matrix, Phenol Red-free (For in vivo experiments, PDX and CDX)

Biogradetech貨號：A-MGL26-5mL

規格：5mL

Biogradetech高濃度無酚紅基質膠（體內實驗PDX/CDX 異種移植）應用：

對細胞3D培養具有更好的支撐性，適用于體內實驗，如體內成瘤，血管生成，腫瘤類器官培養，PDX建模等。

操作方法：

類器官培養、分化

1. 將分裝后的基質膠置于碎冰盒中，并將其置于4℃冰箱過夜融化備用；

2. 實驗開始前，將24孔培養板置于37℃培養箱中預熱；

3. 將收集到的細胞懸液與溶解后的基質膠以體積比1：2的比例進行混合，并放置于冰盒之上；（此操作需在冰盒上進行，防止基質膠凝固）

4. 取出預熱的24孔板，并使用預冷的槍頭吸取50μL混合物，快速滴加在培養孔板中；

5. 將24孔板放置于培養箱中，靜置5min，之后將孔板倒扣，靜置25min；

6. 待基質膠凝固后，向24孔板中添加500μL的類器官培養基，并放置于培養箱中繼續培養。

體外血管生成研究

1. 將96孔板放置于冰盒之上，取70-100μL基質膠加入到板孔中，輕輕震蕩使其均勻鋪滿板底；

2. 將孔板置于37℃的細胞培養箱中使基質膠凝固；

3. 取200μL含有1×104個的HUVEC細胞添加到凝固的基質膠之上；

4. 將處理好的孔板放置于細胞培養箱內進行孵育；

5. 在之后的2-12h內不間斷觀察生成的血管樣網絡結構。

薄膠成膠方法：

1. 凍融后，用預冷的移液槍頭混勻基質膠成勻漿狀；

2.將需要使用的培養板置于冰上，加入濃度為50 μL/cm2生長面積的基質；

3. 在37℃放置30分鐘，即可使用。

厚膠成膠方法：

1. 凍融后，用預冷的移液槍頭混勻基質膠成勻漿狀；

2. 將需要使用的培養板置于冰浴，將培養的細胞與基質膠混合，用移液槍頭使其懸浮于基質中，加入濃度為150－200 μL/cm2生長面積的基質膠；

3. 在37℃放置30分鐘，可成膠，可以加入細胞培養的基質，也可使細胞直接生長在膠表面。

薄層包被方法：

1. 凍融后，用預冷的移液槍頭混勻基質膠成勻漿狀；

2. 根據使用需要，采用無血清培養基稀釋基質膠，根據實驗需要確定最佳包被濃度；

3. 將稀釋的基質膠包被于所需的培養器皿中，包被量至少覆蓋整個器皿的生長表面。室溫下孵育1小時；

4. 去除未結合的基質膠，用無血清培養基輕輕地沖洗。