Epigentek丨艾美捷代理貨號：A-1014-010 5-甲基胞嘧啶(5-mC)單克隆抗體[33D3]，DNA甲基化研究的核心工具

在生命科學的深邃圖譜中，遺傳密碼由A、T、C、G四種堿基書寫而成，是生命藍圖的基石。然而，超越這經典序列之上，還存在著一個更為精細的調控層——表觀遺傳學。其中，DNA甲基化作為最重要的表觀遺傳修飾之一，如同在DNA序列上添加的精密“化學標記”，深刻影響著基因的表達命運，而不改變DNA序列本身。在這一領域中，5-甲基胞嘧啶 (5-mC) 單克隆抗體[33D3]貨號：A-1014-010尤其是高特異性的單克隆抗體，成為了科學家們解讀表觀遺傳密碼的關鍵。

Epigentek集團公司是創新技術和表觀遺傳學相關研究產品的開發商和供應商。公司開發了包括400多個專利產品的全面的產品組合，為表觀遺傳學方面的研究和新藥研發提供全面系統的解決方案。各界備受推崇的學者、制藥企業以及先進的生物技術公司都在使用Epigentek產品。相比普通方法的產品而言，這些獨特的產品在科研分析過程中更簡單、更快捷、更方便、更有效。

第五堿基：5-甲基胞嘧啶與DNA甲基化

DNA甲基化的核心過程，是在DNA甲基轉移酶家族的催化下，將一個甲基集團精確地添加到胞嘧啶環的第五位碳原子上，從而將普通的胞嘧啶轉化為5-甲基胞嘧啶。這一微小卻至關重要的化學修飾，使5-mC贏得了“第五堿基”的美譽。它并非隨機分布，在哺乳動物基因組中，5-mC尤為富集于CpG島——這些是胞嘧啶和鳥嘌呤二核苷酸高度集中的區域。

DNA甲基化在哺乳動物的生長發育中扮演著不可或缺的角色。它如同一個基因表達的“開關”：當基因的啟動子區域被5-mC標記，通常會招募抑制性蛋白復合物，導致染色質結構變得致密，從而關閉該基因的轉錄活性。這種機制對于細胞分化、基因組印跡、X染色體失活等關鍵生物學過程至關重要。然而，這一精密的調控系統一旦失衡，便會引發嚴重后果。研究表明，DNA甲基化狀態具有組織特異性，并且在腫瘤發生過程中，普遍呈現出兩種看似矛盾的趨勢：在全局基因組范圍內出現低甲基化，這可能激活原癌基因并導致基因組不穩定；同時，在特定抑癌基因的啟動子區域卻發生高甲基化，從而沉默這些基因的功能，為腫瘤細胞的增殖與存活鋪平道路。因此，精確繪制5-mC在基因組中的分布圖譜，已成為理解發育生物學、腫瘤學及多種疾病機制的核心課題。

合成的含有不同數量5的寡聚物-用抗5-甲基胞嘧啶捕獲甲基胞嘧啶來自不同公司的抗體，然后進行比色分析檢測以進行比較。結果顯示Epigentek的5-mC抗體在捕獲方面具有最高的敏感性和特異性甲基化DNA片段。

精準識別的利器：33D3克隆小鼠單克隆抗體

為了在復雜的DNA混合物中特異性地“捕捉”到5-mC這一微小修飾，科研人員開發出了多種工具，其中抗體因其高特異性和兼容多種實驗技術平臺而備受青睞。本文所介紹的便是一款性能優質的小鼠源性單克隆抗體，它靶向5-甲基胞嘧啶，克隆號為33D3。

1. 抗體特性與質量控制

這是一款經過嚴格純化的MeDIP/ChIP級別抗體。其免疫原是通過將5-mC與卵清蛋白偶聯而制成，以此成功激發了小鼠的免疫反應，并最終通過雜交瘤技術篩選出能穩定分泌單一特異性抗體的33D3克隆。該抗體屬于IgG1亞型，并采用Protein A進行純化，確保了抗體的高純度和均一性。最終產品為1 mg/ml濃度的純化IgG，溶于pH 7.4的磷酸鹽緩沖液中，便于直接用于實驗。

2. 優質的特異性與廣泛的適用性

此抗體的核心價值在于其優質的特異性。它能夠精準識別5-mC這一修飾堿基本身，而幾乎不與未修飾的普通胞嘧啶發生交叉反應。這種高度的區分能力，是所有基于該抗體的實驗結果可靠性的根本保障。此外，由于其識別的是進化上高度保守的表位，該抗體具有廣泛的種屬反應性，可應用于來自人類、小鼠、大鼠等多種生物的樣本，極大地擴展了其應用范圍。

實踐指南：應用、儲存與操作

1.多元化的應用場景

這款33D3克隆5-mC抗體是一款多功能的科研工具，兼容多種主流的分子生物學和細胞生物學技術：

點雜交/斑點印跡： 用于快速定性檢測樣本中是否存在甲基化DNA，建議稀釋比例為1:1000至1:2000。

免疫組織化學/免疫熒光： 用于在組織切片或細胞中直觀地定位和觀察DNA甲基化的空間分布，建議稀釋比例為1:100至1:500。

酶聯免疫吸附試驗： 用于對DNA甲基化水平進行相對定量，建議稀釋比例為1:1000至1:2000。

甲基化DNA免疫共沉淀： 這是一種強大的技術，能夠富集基因組中被甲基化的DNA片段，以便進行后續的PCR、微陣列或高通量測序分析。建議使用量為每反應0.5至1微克。

需要強調的是，上述建議稀釋度僅為起始參考，使用者在實際研究中需根據具體實驗條件、樣本類型和試劑，通過預實驗來優化確定最佳工作濃度。

2.規范的儲存與操作

為確?？贵w活性和實驗的重復性，正確的儲存和處理至關重要：

儲存條件： 抗體在4°C條件下可穩定保存6個月（自發貨日起）。為進行長期儲存，建議將抗體分裝成小份，并保存于-20°C環境中。務必避免反復凍融，因為多次凍融循環會損害抗體的結合能力，導致效價下降。

操作建議： 在首次打開樣品管蓋之前，建議先進行低速離心，將管壁和管蓋內的液體收集至管底，以確保取用劑量的準確并最大程度回收產品。

這款抗體在文獻和產品目錄中可能以多種名稱出現，如5-methylcytidine、anti-5-methylcytosine、anti-5mC、5meC等，研究者在使用數據庫檢索或比對產品時需留意。

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