AST活性分析工具：天冬氨酸轉氨酶比色活性測定試劑盒

Cayman的天冬氨酸氨基轉移酶（AST）比色活性測定試劑盒提供了一種方便的方法，用于在血清、血漿、組織樣本和細胞裂解液中檢測AST活性。通過監測與蘋果酸脫氫酶（MDH）耦聯的反應系統中NADH氧化的速率來測量AST活性。NADH氧化成NAD+伴隨著在340納米處吸光度的降低。在AST活性速率成為限制性條件的情況下，吸光度降低的速率與樣本中的AST活性直接成比例。添加了乳酸脫氫酶（LDH）以防止血清中通常存在的內源性丙酮酸的干擾。

需要但未提供的：請下載試劑盒手冊，以驗證是否需要超純水（Milli-Q或等效物）或該測定的其他任何組分。

警告：本品不適用于人類或獸醫用途。

測定方案：

艾美捷Cayman的天冬氨酸轉氨酶比色活性測定試劑盒（#701640-96），用于在血清、血漿、組織樣本和細胞裂解液中檢測AST活性。通過監測與蘋果酸脫氫酶（MDH）耦聯的反應系統中NADH氧化的速率來測量AST活性。NADH氧化成NAD?伴隨著在340納米處吸光度的降低。在AST活性速率成為限制性條件的情況下，吸光度降低的速率與樣本中的AST活性直接成比例。添加了乳酸脫氫酶（LDH）以防止血清中通常存在的內源性丙酮酸的干擾。

樣本準備：

血漿

通常，正常人血漿中的AST濃度范圍為8-40 U/L。

1. 使用肝素或檸檬酸等抗凝劑采集血液。

2. 在4℃下，以700-1000g的速度離心血液10分鐘。用移液管取上層黃色血漿層，不要擾動白色纖維層。將血漿存放在冰上。如果不在同一天進行測定，存放在-80℃。避免反復凍融。

3. 血漿在測定前不需要稀釋。

血清

通常，正常人血清中的AST濃度范圍為8-40 U/L。

1. 采集血液時不使用肝素或檸檬酸等抗凝劑。

2. 讓血液在25℃下凝固30分鐘。

3. 在4℃下，以2000g的速度離心血液15分鐘。用移液管取上層黃色血清層，不要擾動白色纖維層。將血清存放在冰上。如果不在同一天進行測定，存放在-80℃。避免反復凍融。

4. 血清在測定前不需要稀釋。

組織勻漿

1. 在解剖前，用pH 7.4的PBS溶液沖洗組織，以去除任何紅細胞和凝塊。

2. 每克組織用5-10毫升冷緩沖液（例如，100 mM Tris，pH 7.8）勻漿。

3. 在4℃下，以10000g的速度離心10分鐘。

4. 取上清液存放在冰上。如果不在同一天進行測定，將樣本存放在-20℃。

注意：如果340納米波長處吸光度降低的速率（A340）大于0.4吸光單位/分鐘，需要用測定緩沖液（1X）稀釋樣本以落在測定的線性范圍內。

細胞裂解液

1. 通過離心（例如，在4℃下，以1000-2000g的速度離心10分鐘）收集細胞（約5×10^5個）。對于貼壁細胞，使用橡膠警察而不是蛋白水解酶。

2. 在0.5-1.0毫升冷緩沖液（例如，100 mM Tris，pH 7.5，1 mM EDTA）中勻漿細胞沉淀物。

3. 在4℃下，以10000g的速度離心10分鐘。

4. 取上清液存放在冰上。如果不在同一天進行測定，將樣本冷凍在-80℃。

注意：如果A340降低的速率大于0.4吸光單位/分鐘，需要用測定緩沖液（1X）稀釋樣本以落在測定的線性范圍內。

添加和恢復

人血清樣本中添加了AST，并使用天門冬氨酸氨基轉移酶比色活性測定試劑盒進行分析。結果如下。

圖. 人血清中的添加和恢復

天冬氨酸轉氨酶比色活性測定試劑盒文獻參考：

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