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特色產品Cayman的丙氨酸轉氨酶(ALT)比色活性測定試劑盒提供了一種檢測血清、血漿、組織樣本和細胞裂解物中ALT活性的便捷方法。ALT活性的測量是通過監測使用乳酸脫氫酶(LDH)的偶聯反應系統中NADH氧化的速率來進行的。NADH氧化為NAD+的同時,340nm處的吸光度降低。在ALT活性是限速的情況下,速率下降與樣本中的ALT活性成正比。
需要但未提供:請下載試劑盒小冊子,以驗證此檢測是否需要超純水(Milli-Q或同等產品)或任何其他成分。
警告:本品不適用于人類或獸醫。
測定方案:
艾美捷Cayman的丙氨酸轉氨酶活性分析試劑盒(#700260-96),提供了一種方便的方法,用于檢測血清、血漿、組織樣本和細胞裂解液中的ALT活性。通過監測乳酸脫氫酶(LDH)耦聯反應系統中NADH氧化的速率來測量ALT活性。NADH氧化成NAD*伴隨著在340納米處吸光度的降低。在ALT活性成為速率限制步驟的情況下,速率的降低與樣本中的ALT活性直接成比例。
執行測定:
1. 陽性對照孔 - 在板中指定的孔中加入150μl的底物、20μl的輔因子和20μl的陽性對照。
2. 樣本孔 - 在板中指定的孔中加入150μl的底物、20μl的輔因子和20μl的樣本。
3. 覆蓋板并在37℃下孵化15分鐘。
4. 移除板蓋,并迅速通過向所有使用的孔中加入20μl的ALT啟動劑來啟動反應。
5. 立即在37℃下每分鐘測量一次340納米處的吸光度,持續10分鐘。如果ALT活性較低,繼續讀取長達60分鐘。注意:背景孔(可選)- 在評估樣本中的ALT活性時,背景活性通常不重要。然而,如果需要,可以為每個樣本獲得背景值。對于每個正在測定的樣本,在板中指定的孔中加入150μl稀釋的測定緩沖液(不含ALT底物)、20μl的樣本、20μl的ALT輔因子和20μl的ALT啟動劑。立即在37℃下每分鐘測量一次340納米處的吸光度,持續10分鐘。如果ALT活性較低,繼續讀取長達60分鐘。

圖. 豬心丙氨酸轉氨酶的活性
丙氨酸轉氨酶活性分析試劑盒文獻參考:
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2.Yang,R.-Z.,Park,S,Reagan,WJ.,et al.Alanineaminotransferase isoenzymes:Molecularcloning and quantitative analysis of tissue expression in rats andserum elevation in liver toxicity.Hepatology 49,598-607(2009).
3.Erecinska,M.,Nelson,D,Nissim,I,et al.Cerebral alanine transportand alanine aminotransferase reaction:Alanine as a source of neuronalglutamate.J.Neurochem.62,1953-1964(1994)
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7.Prati,D.,Taioli,E,Zanella,A,et al.Updated definitions of healthy ranges forserum alanine aminotransferase levels.Ann Intern Med.137,1-9(2002).
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