AAT Bioquest-熒光法NADP/NADPH比率檢測試劑盒,紅色熒光解決方案

煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD+）和煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADP+）是細胞中發現的兩種重要輔因子。NADH是NAD+的還原形式，NAD+是NADH的氧化形式。它通過酯鍵在腺苷酸的2'位添加磷酸基團形成NADP。NADP用于合成代謝生物反應，如脂肪酸和核酸合成，這些反應需要NADPH作為還原劑。傳統的NAD/NADH和NADP/NADPH測定是通過監測340 nm處的NADH或NADPH吸收來完成的。這種方法靈敏度低，干擾大，因為該測定是在紫外范圍內進行的，需要昂貴的石英微孔板。AAT Bioquest的Amplite?NADP/NADPH比值檢測試劑盒為靈敏檢測NADP、NADPH及其比值提供了一種方便的方法。系統中的酶在酶循環反應中特異性識別NAD/NADH。無需從樣品混合物中純化NADP/NADPH。酶循環反應顯著提高了檢測靈敏度。此外，該測定的背景非常低，因為它在紅色可見光范圍內運行，大大減少了生物樣本的干擾。該檢測方法具有高靈敏度和低干擾性。Amplite熒光NADP/NADPH檢測試劑盒可采用方便的96孔或384孔微量滴定板形式進行，易于自動化，無需分離步驟。

圖：Syn、Syn/PFP、沼澤紅蜘蛛和沼澤紅蜘蛛/PFP的NADPH/NADP+和ATP含量。使用Amplite熒光分析試劑盒15264發現NADP+/NADPH比值。來源：溫宇等，《科學進展》第9卷（11）：eadf6772。2023年3月。

艾美捷AAT Bioquest-熒光法NADP/NADPH比率檢測試劑盒,紅色熒光：

貨號 15264

單位尺寸 250次測試

預期用途 僅用于研究（RUO）

風險短語 R20, R21, R22

UNSPSC 12352200

吸光度 576 ± 5 nm

推薦板 透明底部

激發 540 nm

發射 590 nm

截止 570 nm

推薦板 實心黑色

組分A：NADP/NADPH循環酶混合物

2瓶（凍干粉）

組分B：NADPH傳感器緩沖液

1瓶（20 mL）

組分C：NADPH標準品

1瓶（167 ?g）

組分D：NADPH提取溶液

1瓶（10 mL）

組分E：NADP提取溶液

1瓶（10 mL）

組分F：NADP/NADPH對照溶液

1瓶（10 mL）

組分G：NADP/NADPH裂解緩沖液

1瓶（10 mL）

方案概要：

準備25 ?L的NADPH標準品和/或待測樣品

加入25 ?L的NADPH或NADP提取溶液

在37°C下孵化15分鐘

加入25 ?L的NADP或NADPH提取溶液

加入75 ?L的NADP/NADPH工作溶液

在37°C下孵化15分鐘至2小時

在激發/發射=540/590 nm（截止=570 nm）監測熒光強度

重要說明：

強烈建議與裂解緩沖液（組分G）一起在37°C下孵化細胞，并使用上清液進行實驗。

在實驗開始前，在室溫下解凍每個試劑盒組分的一個。

庫存溶液的準備：

除非另有說明，所有未使用的庫存溶液應在制備后分成單次使用的小份，并儲存在-20°C。避免反復凍融。

NADPH標準溶液（1 mM）

將200 ?L的PBS緩沖液加入NADPH標準品（組分C）的小瓶中，制成1 mM（1 nmol/?L）的NADPH標準溶液。

工作溶液的準備

將10 mL的NADPH傳感器緩沖液（組分B）加入NADP/NADPH循環酶混合物（組分A）的瓶中，并充分混合，制成NADP/NADPH工作溶液。

注意       這種NADP/NADPH工作溶液足夠在96孔板中進行125次測定。

文獻參考：

Synergistic and stepwise treatment of resveratrol and catechol in Haematococcus pluvialis for the overproduction of biomass and astaxanthin

Authors: Qiu, Jia-Fan and Yang, Yu-Cheng and Li, Ruo-Yu and Jiao, Yu-Hu and Mou, Jin-Hua and Yang, Wei-Dong and Lin, Carol Sze Ki and Li, Hong-Ye and Wang, Xiang

Journal: Biotechnology for Biofuels and Bioproducts (2024): 80

The Function of HDAC6 Mediated Prx2 Acetylation in Neuronal Apoptosis Related Alzheimer's disease

Authors: Zhang, Lijie and Hu, Jinxia and Zhang, Tao and Gao, Huimin and Wu, Xingrui and Zhang, Conghui and Zhang, Cheng and Chen, Hao and Yang, Minggang and Cao, Xichuan and others,

Journal: (2024)

Solar-powered multi-organism symbiont mimic system for beyond natural synthesis of polypeptides from CO2 and N2

Authors: Yu, Wen and Zeng, Yue and Wang, Zenghao and Xia, Shengpeng and Yang, Zhiwen and Chen, Weijian and Huang, Yiming and Lv, Fengting and Bai, Haotian and Wang, Shu

Journal: Science Advances (2023): eadf6772

The Linkage of Yeast Metabolites, Produced Under Hyperosmotic Stress, to Cellular Cofactor Systems During Icewine Fermentation.

Authors: Allie, Robert

Journal: (2022)

The combined effect of nitrogen deprivation and overexpression of malic enzyme gene on growth and lipid accumulation in Phaeodactylum tricornutum

Authors: Zhang, Ruihao and Zhu, Baohua and Tu, Changchao and Li, Yun and Zhao, Yan and Pan, Kehou

Journal: Journal of Applied Phycology (2021): 1--9

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