MP Biomedicals MagBeads 石蠟包埋樣本RNA提取試劑盒（磁珠法）操作步驟

MagBeads FastRNA Kit for FFPE采用高結合力的磁珠，經過裂解和消化，將RNA釋放到裂解液中。加入磁珠和Binding Buffer后，RNA被吸附于磁珠表面，蛋白質和其他雜質不會被吸附。Wash Buffer去除多余的雜質，再用乙醇洗去多余鹽分，最后用Elution Buffer將RNA洗脫。

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1. 使用手術刀修剪掉樣本塊上多余的石蠟。切取最多8片（5~20微米厚）切片。注意：如果樣本曾暴露于空氣中，需丟棄最初的2~3片樣本。

2. 向樣本管中加入600微升Buffer DPS，渦旋振蕩5秒，并短暫離心使溶液集中于管底。

3. 在56℃下孵育3至5分鐘，并渦旋振蕩5秒以溶解石蠟。注意：Buffer DPS可能會變得渾濁或不透明。如果發生這種情況，需額外加入Buffer DPS并重復此步驟。

4. 以14,000×g離心2分鐘，并小心丟棄上清液，避免干擾沉淀物。

5. 向樣本中加入150微升Buffer FRL和20微升蛋白酶K，渦旋振蕩。在55℃下孵育15分鐘。注意：在80℃下孵育可以逆轉甲醛修飾的核酸。孵育時間過長會導致RNA降解。

6. 短暫離心1.5毫升管，去除管蓋內側的液滴。加入150微升Buffer AL，立即轉移樣本至2毫升微量離心管或2毫升96孔樣本板（不直接倒出樣本）。渦旋振蕩5秒，然后在80℃下孵育15分鐘。短暫離心樣本，然后進入提取步驟。

磁珠操作步驟：

1. 在96孔深孔板的孔中加入20微升磁珠顆粒和300微升異丙醇。用移液器混合10次，并在700~900轉/分鐘下振蕩6分鐘。將深孔板放在磁板上，讓磁珠聚集5分鐘。在磁板上進行吸液操作，丟棄板中的上清液。

2. 加入500微升Buffer MW1，并在900~1200轉/分鐘下振蕩1分鐘以重新懸浮磁珠。將試管放在磁架上1分鐘，然后移除上清液。將板留在磁分離裝置上，等待1分鐘。用移液器移除殘留液體。將磁珠顆粒額外干燥1分鐘。

3. 向樣本中加入100微升DNase混合液（100微升DNase緩沖液+10微升DNase I），通過在600~900轉/分鐘下振蕩10~15分鐘進行混合。

4. 向樣本中加入500微升Buffer MW1，振蕩5分鐘。將試管放在磁架上1分鐘，然后移除上清液。

5. 加入500微升Buffer MW2，并振蕩1分鐘以重新懸浮磁珠。將試管放在磁架上1分鐘，然后移除上清液。

6. 重復步驟5一次。

7. 將板留在磁分離裝置上，等待1分鐘。用移液器移除殘留液體。將磁珠顆粒額外干燥3~5分鐘。

8. 向樣本中加入30~100微升無RNase水，并通過振蕩5分鐘進行混合。將試管放在磁架上3分鐘。

9. 將含有純化RNA的清澈上清液轉移到新管中，并將RNA在-20℃下保存。

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