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特色產品在生命科學研究和臨床診斷領域,特異性強、靈敏度高的抗體是進行免疫學檢測,尤其是免疫熒光實驗的關鍵工具。AlexaFluor488標記山羊抗小鼠IgG(H+L)多克隆抗體(貨號:115-545-003)便是一款經過精心設計與純化的次級抗體,廣泛應用于以小鼠源性一抗為核心的多種檢測體系中。本文旨在對該抗體的核心特性、應用范圍及操作規范進行系統性的梳理與介紹。
Jackson 總部位于美國賓夕法尼的蘭卡斯特,距離費城大概有40英里。Jackson在1982年由科學家展開了包括在細胞生物學,蛋白質化學,微生物學,免疫學及產品開發實驗研究。 Jackson產品僅用于研究,不用于診斷或治療用途。作為美國各種二抗生產公司之一,Jackson在各國設有幾十家代理。由于其產品效價 高、種類全、價格低廉,因而成為各大藥廠、試劑盒生產廠、大型實驗室采購此類試劑的優選選。其產品主要包括:各種純化的二抗、標記的二抗(AMCA、 Cy2、FITC、Cy3、TRITC、RRX、TR、Cy5、長臂生物素、辣根酶和堿磷酶標記)等。
一、核心特性與靶向特異性
此抗體來源于山羊,其靶標為小鼠的免疫球蛋白G。它屬于“全分子IgG”抗體,這意味著其結構完整,包含一個Fc片段和兩個通過二硫鍵連接的抗原結合Fab片段,形成了分子量約為160kDa的二價結構。這種完整的結構使其適用于絕大多數常規免疫檢測實驗,并且在成本效益上具有優勢。
其“特異性”標注為“IgG(H+L)”,這是一個至關重要的特性。它不僅能夠與小鼠IgG的重鏈(H)發生反應,也能與其輕鏈(L)結合。由于不同類和亞類的免疫球蛋白(如IgM,IgA等)共享相同或相似的輕鏈,因此該抗體除了能與小鼠的各類IgG亞型結合外,還能識別小鼠其他含有相同輕鏈的免疫球蛋白,例如IgM和IgA。這種廣泛的反應性使得研究人員在實驗中無需針對不同類別的小鼠抗體更換不同 的次級抗體,大大提高了實驗的靈活性和便捷性。
經過免疫電泳和/或ELISA方法的驗證,該抗體僅與小鼠免疫球蛋白發生特異性反應,未檢測到針對非免疫球蛋白血清蛋白的抗體活性,確保了其在復雜生物樣本中應用的低背景和高信噪比。需要注意的是,由于不同物種間免疫球蛋白可能存在同源性,該抗體存在與其他物種免疫球蛋白發生交叉反應的可能性,在實際應用中需予以考慮。
二、高純度制備與穩定保存
為保證抗體的性能,其純化過程采用了高特異性的免疫親和層析法。通過將抗原固定在瓊脂糖珠上,能夠從抗血清中高效、特異地分離出目標抗體,從而獲得高純度的產物。
該抗體以凍干粉的形式提供,這是一種利于長期穩定的物理狀態。未重新溶解的凍干粉應在2-8°C條件下儲存。在使用前,需按照產品說明書指定的體積加入去離子水進行重懸。若溶液不夠澄清,可進行離心處理。重懸后的抗體原液在2-8°C下可穩定保存約6周。
對于更長期的保存,建議采取以下兩種策略之一:
1.分裝凍存:將重懸后的抗體分裝到小管中,于-70°C或更低的溫度下冷凍保存,并嚴格避免反復凍融。
2.甘油保存:在抗體原液中加入等體積的甘油(最終濃度為50%),然后以液體形態儲存于-20°C。
無論采用何種保存方式,自重新水化之日起,產品的有效期為一年。若經測試,抗體在特定應用中的性能仍符合要求,此有效期可適當延長。
產品的基礎緩沖體系為0.01M磷酸鈉和0.25M氯化鈉,pH值7.6。為了維持抗體的穩定性與活性,其中添加了15mg/ml的無IgG、無蛋白酶牛血清白蛋白作為穩定劑,并含有0.05%的疊氮鈉作為防腐劑,以抑制微生物生長。
三、高效熒光標記物:AlexaFluor488
該抗體的標記物為AlexaFluor488,這是一種性能優異的綠色熒光染料。其最大激發波長和最大發射波長分別為493nm和519nm。
與傳統的熒光標記物如FITC、Cy2和DyLight488相比,AlexaFluor488在水性封片劑中表現出更高的熒光亮度和光穩定性,同時其熒光信號對pH變化的敏感性更低。這些特性使得AlexaFluor488標記的抗體能夠為所有需要綠色熒光信號的免疫熒光實驗(如細胞成像、組織切片染色、流式細胞術等)提供更高的檢測靈敏度。的例外是那些需要使用塑料封片劑的實驗方案,因為某些有機溶劑可能會影響AlexaFluor488的性能。
四、使用建議與操作要點
在實際應用中,該抗體的建議工作稀釋度范圍在1:100至1:800之間。需要特別強調的是,這個范圍僅為參考起點,最佳的稀釋倍數必須通過實驗進行經驗性確定(即進行滴度測試)。
影響最佳稀釋度的因素眾多,包括但不限于:
抗原密度:樣本中目標抗原的豐度。
樣本通透性:抗體能否有效到達細胞內抗原。
樣本類型:細胞涂片、組織切片(石蠟包埋或冰凍)或流式細胞術樣本。
一抗的種類和濃度。
檢測系統的靈敏度。
因此,為了獲得信噪比最佳、特異性最強的實驗結果,強烈建議研究人員針對自己的實驗體系,設置一系列不同稀釋度的抗體進行預實驗,以找到最適合自身條件的工作濃度。
五、產品引用次數:388

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