Alpha Diagnostic International（ADI）細菌脂多糖 （LPS） 提取試劑盒（最多 50 個樣品）使用前的注意事項

脂多糖（LPS），也稱為脂多糖，是由脂質和多糖通過共價鍵連接而成的大分子；它們存在于革蘭氏陰性細菌的外膜中，作為內毒素，能在動物中引起強烈的免疫反應。LPS是革蘭氏陰性細菌細菌細胞壁的主要成分，對細菌的結構完整性貢獻巨大，保護膜免受某些類型的化學攻擊。LPS還增加了細胞膜的負電荷，有助于穩定整體膜結構。它對革蘭氏陰性細菌至關重要，如果發生變異或被移除，它們將死亡。LPS是一種內毒素，能引起正常動物免疫系統的強烈反應。它還涉及細菌生態學的非致病方面，包括表面粘附、噬菌體敏感性和與捕食者（如阿米巴）的相互作用。LPS對于Omptin活性的正確構象是必需的；然而，平滑LPS會立體阻礙omptins。LPS作為典型的內毒素，因為它結合了CD14/TLR4/MD2受體復合物，這促進了多種細胞類型中促炎細胞因子的分泌，尤其是在巨噬細胞和B細胞中。在免疫學中，“LPS挑戰”一詞指的是將受試者暴露于可能作為毒素的LPS的過程。LPS也是一種外源性致熱原（外部發熱誘導物質）。由于對革蘭氏陰性細菌至關重要，這些分子成為新抗菌劑的候選靶點。

熱苯酚水提取法通常用于提取LPS，但耗時長，程序復雜。當我們試圖操縱如此少量的細胞時，該方法有主要局限性。LPS提取試劑盒旨在快速、方便地從細菌細胞中微量提取LPS，廣泛適用于不同的革蘭氏陰性細菌，適用于少量細胞。

第1步：裂解

細菌細胞通過有機溶液裂解。細胞膜的磷脂和蛋白質組分被破壞，細胞組分釋放到溶液中。

第2步：LPS純化

在高鹽濃度溶液中純化LPS。

第3步：洗滌和洗脫

通過洗滌步驟短暫去除鹽分，以獲得高質量的LPS。

作為Alpha Diagnostic International（ADI）在中國的區域總代理，艾美捷科技強烈推薦Alpha Diagnostic International（ADI）熱銷產品細菌脂多糖 （LPS） 提取試劑盒（最多 50 個樣品）。產品僅用于科研，不可用于臨床診斷。

細菌脂多糖 （LPS） 提取試劑盒（最多 50 個樣品）使用前的注意事項

1. LPS提取的產量與培養體積的增加成正比。當使用5毫升培養物時，LPS的產量最大。我們不推薦處理超過5毫升的細菌培養物。如果使用過量的培養體積，裂解將效率低下，產量將減少，細胞蛋白對LPS的污染將增加。通常，最佳培養體積為2毫升，OD為0.8-1.2。

2. 要從細菌細胞中獲得更高純度的LPS，按照以下程序用蛋白酶K處理提取的LPS。

LPS提取程序

步驟

1. 在室溫下以13,000rpm離心，收集2-5毫升的細菌細胞。

注意：去除所有上清痕跡。對于沉淀的細胞，在使用前通過反復敲擊管子徹底松動細胞團。細胞團未完全松動可能導致裂解效率低下和產量減少。

2. 加入1毫升裂解緩沖液并劇烈渦旋。注意：為了提高細菌細胞的裂解，直到細胞團消失為止，要劇烈渦旋。

3. 加入200微升氯仿后，劇烈渦旋10-20秒。并在室溫下孵育5分鐘。注意：在渦旋前觀察管子。當加入氯仿時，會看到一條白線在上層（藍色層）下方形成，因為氯仿層向下移動。這個區域包含細胞碎片、蛋白質和基因組DNA和RNA的混合部分。加入氯仿的目的是將苯酚層與水層分離，最終分離RNA和基因組DNA/蛋白質。

4. 在4℃下以13,000rpm離心10分鐘。將400微升上清轉移到新的1.5毫升管中。

注意：在吸取上層時，注意不要形成任何白色沉淀。

5. 加入800微升純化緩沖液并混合均勻。在-20℃下孵育10分鐘。注意：這一步的目的是純化LPS，使其與其他細胞提取物（例如蛋白質、核酸、脂質等）分離。

6. 在4℃下以13,000rpm離心溶液15分鐘后，去除上層以獲得LPS沉淀。

7. 加入1毫升70%乙醇，通過倒置管子2-3次洗滌LPS沉淀。在4℃下以13,000rpm離心混合物3分鐘。丟棄上層并干燥剩余的LPS沉淀。注意：這是洗滌階段，以去除鹽分等雜質。在室溫下干燥沉淀。

8. 向LPS沉淀中加入30-50微升10mM Tris-HCl緩沖液（pH 8.0），并通過渦旋或吸取使其溶解。并通過煮沸2分鐘完全溶解LPS。

注意：要從細菌細胞中獲得更高純度的LPS，用蛋白酶K處理提取的LPS。每1微克LPS處理2.5微克蛋白酶K，并在50℃下孵育30分鐘。

Alpha Diagnostic International（ADI）公司于1993年成立， 是一家美國私營生物技術公司，總部位于德克薩斯州圣安東尼奧，具有USDA認證的動物試驗設施。公司致力于開發、制造和供應新型診斷和質量控制試劑及檢測試劑盒，用于人類和動物的基礎生物學和疾病研究。同時，還提供多肽合成定制服務和多抗產品以及其他抗體相關服務，例如純化親和素，酶耦聯物，染料，熒光染料等。ADI旨在準確了解科學研究人員和診斷測試界的需求，并迅速提供有效的解決方案，成為科學界值得信賴的創新試劑和解決方案提供商。

艾美捷科技是Alpha Diagnostic International（ADI）的中國代理商，為科研工作者提供優質的產品與服務。