Immunochemistry：Caspase-1活性檢測試劑盒

程序性細胞死亡 (Programmed cell death, PCD) 是多細胞生物中，由基因調控的細胞自殺過程，常見的PCD包括細胞焦亡(Pyroptosis)、凋亡(Apoptosis)和自噬(Autophagy)。  

今天我們就來聊一聊細胞焦亡(Pyroptosis)。當細胞發生焦亡時，由于細胞膜破裂導致內容物的釋放，會激活強烈的炎癥反應。細胞焦亡激活的通路包括依賴Caspase-1的經典途徑和依賴Caspase-4、5、11的非經典途徑。  

依賴Caspase-1的細胞焦亡經典途徑：

Caspase-1首先被激活，激活的Caspase-1切割Gasdermin D，生成含氮端活性域的肽段，該結構域結合膜脂并在細胞膜上打孔，導致細胞滲透壓的變化，進而發生脹大直至細胞膜破裂。同時，活化的Caspase-1對IL-1β和IL-18的前體進行切割，形成有活性的IL-1β和IL-18，并釋放到胞外，募集炎癥細胞聚集，擴大炎癥反應。  

依賴Caspase-4、5、11的細胞焦亡非經典途徑：

通常是細胞質脂多糖（lipopoly-saccharide，LPS）直接激活Caspase-4、Caspase-5和Caspase-11，活化的Caspase-4、5、11切割Gasdermin D產生與Caspase-1相同的裂解作用，從而導致細胞膜穿孔。

細胞焦亡與細胞凋亡相似，與細胞凋亡不同的是，細胞焦亡主要是由caspase-1激活的。因此檢測caspase-1活性是細胞焦亡分析的關鍵。  

美國ICT的用于細胞焦亡分析的Caspase-1檢測試劑盒利用FLICA?技術檢測Caspase-1活性。這些試劑盒包含caspase-1抑制劑，該抑制劑包含caspase-1的首選結合序列Tyr-Val-Ala-Asp (YVAD)。FLICA試劑FAM-YVAD-FMK（最佳激發波長為488-492 nm，最佳發射波長為515-535 nm），是無細胞毒性的，細胞膜滲透抑制劑。進入細胞，并不可逆地與活化的caspase-1結合。任何未結合的FAM-YVAD-FMK-FLICA試劑擴散出細胞并被沖走。因此留在細胞內的綠色熒光直接體現了活性caspase-1酶活性的。熒光結果可通過熒光酶標儀、熒光顯微鏡、流式細胞儀進行分析。

* 僅供科研使用，不得用于醫療. 

用陰性對照(非誘導的，A)或5 ng/mL的佛波酯PMA誘導處理的THP-1細胞，使其成為巨噬細胞樣細胞(誘導的，B)。48小時后，從誘導種群中去除PMA，用含有10 ng/mL LPS的新鮮培養基替代，誘導caspase-1激活。2小時后，細胞被FAM-YVAD-FMK染色1小時，清洗，并在顯微鏡下觀察。在誘導的樣品中，許多細胞呈現亮綠色，表明caspase-1活性水平增加(B，誘導，右)。在非誘導的樣品中，很少可見綠色細胞，表明caspase-1活性水平較低(a，非誘導，左)。   

美國ICT除了可提供全面的細胞活性檢測相關試劑，包括凋亡、 caspase、 自噬、細胞毒性、壞死等相關檢測，還可以同時提供高質量高靈敏度的 ELISA以及相關試劑，包括包被液、封閉液、 沖洗液、 底物、 終止液、 板子等等。 —————————————————————————————————————————— 

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