Milenia Biotec GmbH：通用側流式檢測條--HybriDetect

一種用于檢測生物素和FITC標記的分析物（蛋白質、基因擴增產物）的通用側流式檢測條 

REF: MGHD 1 

規格：100 Texts

注意：重要更改在邊緣處用虛線表示。在說明書的最后，您將找到一張列出引入更改原因的表格。  

一、符號解釋

二、警告和注意事項 

1.所有試劑應在原始容器中存放在2-8℃的環境中。

2.使用前，將所有試劑恢復至室溫（18-28 ℃）。

3.必須遵守所有組分的有效期限。

4.保護檢測條免受濕氣影響；容器必須始終密封。 

5.只接觸和標記檢測條的箔紙覆蓋區域（標記區域）。

6.廢棄物的處理必須按照當地的法規進行。

7.檢測緩沖液含有抗微生物試劑，因此避免與皮膚和/或黏膜接觸。 

8.適用于專業用戶。   

三、預期用途 

HybriDetect是一種通用的側流式檢測條，用于檢測標記有FITC和生物素的分析物（蛋白質、基因擴增產物）。它是一個開發平臺。

該測試僅供研究使用，不用于診斷目的。  

四、提供的材料、儲存和穩定性

可根據要求或從公司網站：www.milenia-biotec.de 獲取材料安全數據表（MSDS）。

五、所需材料（不包括在內） 

1、移液管 

2、移液管尖（含有PCR的保護性過濾器） 

3、反應管或96孔微孔板   

六、必要的開發工作-開發平臺 

開發一個含有兩種不同標記的探針用于分析物的溶液。

以下條件是必要的： 

探針必須標記有：FITC（異硫氰酸熒光素）；生物素 

在檢測過程中，使用約100微升的液體（樣品和特定于分析物的溶液）。 

所提供的檢測緩沖液（MGCB）可以用作該特定于分析物的溶液的基礎緩沖液。 

使用示例： 

20微升樣品和80微升特定于分析物的溶液，孵育時間為5分鐘。 

注意：

1、體積、特定于分析物的溶液和孵育時間是個體測試開發的一部分。

2、檢測基因擴增子的基本步驟在第7頁解釋：“檢測性能PCR產物”。擴增產物應該被生物素化，特異性雜交探針應該標記有FITC。原則上，所有擴增程序（聚合酶鏈式反應或等溫擴增，如LAMP或RPA）都可以使用。  

七、方法： 

Milenia HybriDetect是一種即用型的通用測試條（側流式試紙），基于使用金顆粒的側流技術。該試紙旨在開發用于多種分析物（如蛋白質、抗體或基因擴增產物）的定性或半定量快速測試系統。用戶需要開發一種特定于分析物的溶液，其中包含用FITC標記的第一種探針（例如抗體、抗原、特異性探針）和用生物素標記的第二種探針（例如抗體、引物）（請參閱第5頁的“常見測試原理”）。 

待測樣品與開發的特定于分析物的溶液混合后，將試紙浸入溶液中。 標記有FITC和生物素的結合分析物首先與試紙的樣品應用區域中標記有金的FITC特異性抗體結合。金復合物在毛細作用力的驅動下通過膜傳播。只有捕獲的分析物金顆粒在通過固定化的生物素配體分子的線時結合，并隨時間形成紅藍色帶狀。 

未結合的金顆粒遷移到控制線上，并被物種特異性抗體捕獲。隨著孵育時間的延長，會形成一條顏色濃烈的控制帶。   

八、常見測試原理

控制帶試紙（Control Band Dipstick） 

無論如何，控制帶必須可見！

它是一個控制功能，不能用來評估測試帶結果的質量。如果孵育期后控制帶 

不可見，結果無效！必須使用新的試紙重復測試！   

九、結果判讀 

有兩種解讀Milenia HybriDetect試紙結果的方式： 

1）通過目視解讀進行定性解讀

2）半定量，例如通過評估卡進行評估

十、PCR產物測定性能

1. 從容器中取出所需數量的試紙條并標記它們。

2. 對于每個要分析的樣品，將100uL的HybriDetect測定緩沖液或個別開發的緩沖液移液到反應管或微孔板孔中。

3. 直接將5-10uL的雜交產物移液到樣品施加區域，或者選擇性地將5-10uL的雜交產物加入反應管/孔的溶液中。

4. 將帶有樣品施加區域的試紙條放入溶液中，垂直放置，孵育時間為5-15分鐘。

5. 孵育結束后，將試紙條從測定溶液中取出，并立即解讀測試結果。

注意：

如果需要更高的分析靈敏度，增加PCR產物的體積可能會有所幫助。

體積、特定于分析物的溶液和孵育時間始終是個別測試開發的一部分。

十一、解讀“PCR”結果

重要提示：為了檢查反應的特異性，強烈建議引入PCR陰性對照。   

十二、PCR故障排除

十三、PCR測定的靈敏度 

Milenia HybriDetect的分析靈敏度相當于或高達乙溴化乙錠染色瓊脂糖凝膠的1,000倍。根據PCR產物的大小和擴增循環的數量，最多可以檢測到5 pg的DNA。   

十四、文獻參考 

Kiatpathomchai W, et al, J Virol Methods (2008); 153: 214-217 

Puthawibool T, et al, J Virol Methods (2009); 156 (1-2): 27-31

Jaroenram W, et al, Mol Cell Probes (2009); 23 (2): 65-70 

Nimitphak T, et al, Mol Cell Probes (2009); 24 (1): 1-5 

Kikuchi T, et al, Nematology (2009) ; 99 (12): 1365-1369 

Piepenburg O, et al, PloS Biology 2006, Volume 4, Issue 7, e204   

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