Biotium：全光譜CF熒光染料

Biotium的總部位于舊金山灣區，是一家為科學家提供創新熒光解決方案的領先供應商。致力于運用化學原理為生命科學和醫學研究中未解決的挑戰提供解決方案，本文主要介紹Biotium公司開發的CF染料。

CF染料是一系列高度水溶性熒光染料，跨越可見光譜和近紅外光譜，可為蛋白質和核酸等生物分子貼上標簽。具有卓越的亮度、光穩定性和信噪比。

CF染料有40多種，穩定性高、亮度高、溶解度高，從藍色到近紅外。

為什么是CF染料？

化學創新

通過特定的化學修飾優化減少染料聚合和提高溶解度，同時減少非特異性的結合和背景熒光(圖1)。

Rhodamine染料具有優異的光穩定性和熒光量子產量，對其結構進一步改造優化，可將發射光擴展到遠紅和近紅外(近紅外)區域(圖2)，仍然保持著高穩定性、亮度和溶解性。以Rhodamine為基礎修飾而來的CF 633 和 CF 640R 染料比光譜比較接近的AF647具有更好的穩定性（圖3-4）。

優異的近紅外（NIR）染料

近紅外染料具有卓越的特異性、靈敏度和線性，比傳統可見光染料具有重要優勢。近紅外染料在體內應用中特別有用，因為組織滲透率更高，組織自熒光干擾更少。然而，近紅外染料往往由于染料聚合過度和溶解性差而出現亮度有限的問題。此外，許多近紅外染料由于硫化而呈高負電荷，導致非特異性結合和更大的免疫原性。

由于新的PEG修改，近紅外CF染料限制了分子內部的流動性，進而提高了量子產量和水溶解性，而不會增加過多的電荷。因此，NIR CF 染料比任何其他近紅外染料（圖5）更明亮、更高光穩定性，并且具有遠大于任何其他近紅外染料的生物相容性。此外，與其他商品化NIR染料相比，NIR CF染料為western blotting和免疫染色提供了更優越的信噪比（圖6）。

無與倫比的多功能性

出色的標記效率

用于生物標記的活性染料通常容易發生水解，從而降低標記效率。重硫化染料，如Alexa Fluor 染料，DyLight 染料和IRDye水解問題尤為嚴重。相比之下，Biotium 的胺反應 CF 染料具有相對穩定的 SE 形式，比許多 Alexa Fluor 染料更耐水解。因此，CF染料 SE產品具有更高的標記效率，從而為用戶提供了更好的價值。Biotium提供的Mix-n-Stain?抗體標記試劑盒中實施并簡化了這項技術，提供29 種 CF 染料選擇的快速高效的標記，只需 30 分鐘，無需純化。此外，Mix-n-Stain?標記試劑具有無與倫比的多功能性，擁有專利緩沖系統，可耐受常見的緩沖添加劑，包括BSA、明膠gelatin、甘油glycerol、Tris、腹水ascites fluid和疊氮鈉azide。

顯微鏡下超高分辨率

許多出版物信息顯示，CF染料為多種方法提供了最佳性能。某些 CF  染料所展示的卓越亮度、光敏度和光化學開關特性非常適合 3D SIM、3D STORM 和其他超分辨率和單分子成像方法。

圖7.使用常規寬場顯微鏡（左）和使用CF 染料標記的STORM（右）進行微管成像的比較。

圖8. CF568（左）產生比Cy3b（右）更好的微管圖像，3-D STORM顯微鏡中。圖片由加州大學伯克利分?；瘜W學院Sam Kenny和Ke Xu教授提供。

多色靈活性

Biotium 目前提供超過 30 種 CF 染料，跨越可見光、遠紅和近紅外光譜，還有更多染料在開發中。CF染料產品系列包括活性染料、直標和間標抗體、核苷酸nucleotides、鏈球菌素streptavidin、鬼筆環肽phalloidin、凝集素lectins和其他生物結合。可去官網下載CF  染料手冊了解更多。

流式應用相關產品

CF Dyes 對應流式應用時的激發和發射光波長

直標抗體和其他生物標記物

Biotium提供廣泛的CF 染料，以及R-PE、APC、PerCP和生物素標記抗體。

1. 多余1000種的單克隆抗體

2. 重組鼠兔單克隆抗體

3. 13種明亮、光穩定的CF 染料

4. 其他R-PE、APC、PerCP、HRP、AP或生物素標記抗體

5. 相匹配的同型對照抗體

6. 不含BSA的純化抗體可結合Mix-n-Stain?標記試劑盒使用

7.  Anti-Tag 和 Anti-Hapten 抗體

1) Mouse MonoclonalAnti-GFP

2) Rabbit Anti-RFP

3) Rabbit Anti-GST

4) Rabbit Anti-HA Tag

5) Mouse Monoclonal Anti-6X His Tag

6) Rabbit Anti-Myc Tag

7) Rabbit Anti-V5 Tag

8) Rabbit Anti-FLAG Tag

9) Mouse Monoclonal Anti-Biotin

10) Mouse Monoclonal Anti-Fluorescein 

抗體標記試劑盒

抗體標記試劑盒Mix-n-Stain? Antibody Labeling Kits

1. 快速高效的標記，最少的實際操作時間

2. 提供29種 CF 染料、R-PE、APC、PerCP或串聯染料

3. 其他標記選項：生物素Biotin和FITC、HRP、AP和GOx

4. 100%產率，無需純化

5. 標記耐受BSA、明膠gelatin、腹水ascitesfluid和Tris

6. 試劑盒可用于標記低至1微克和高達1毫克的IgG抗體

7. 還提供用于納米體體的標記試劑盒

圖12.CF Dye Mix-n-Stain? 標記流程概覽，標記熒光蛋白 (如, R-PE, APC), 復合染料, 和酶的流程有些不同。

圖13. Mix-n-Stain? APC 標記CD3，染色Jurkat 細胞，Mix-n-Stain? APC 相比其他類似產品有更低的非特異性結合（粉）和更高的陽性亮度（藍）。

蛋白試劑盒CF Dye SE Protein Labeling Kit

1. 允許更靈活地進行標記的優化試劑盒

2. 可選擇19種CF dye或生物素

3. 包括用于3 x 1 mg純化標記反應的試劑

4. 包括確定標記程度（DOL）的說明 

細胞分析試劑

1. 細胞活力測定

2. 細胞增殖與細胞周期

3. 凋亡與壞死

4. 線粒體膜電位染料

圖14.Biotium提供14種膜不通透的胺基結合死活染料，結合穩定，適用于固定破膜的胞內分析實驗。

流式輔助試劑

光譜流式

光譜流式細胞術是一種快速發展的技術，與傳統流式細胞術相比，它的復用能力顯著增強。傳統的流式細胞儀可以檢測最多二十幾色的多色實驗，而光譜流式已經做到40色以上。

Biotium提供的CF染料就有獨特的光譜分布，進一步豐富了染料的選用范圍，其中活性染料Live-or-Dye?510/550, 665/685, 375/600, 和 615/740可很好地應用于光譜流式。如下SI(相似性)矩陣供參考（Cytek儀器上測得）：

Reference

CF Dyes - Next Generation Fluorescent Dyes for Biological Research (biotium.com)