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品牌專題CAR-T療法的療效可能會因T細胞耗竭而受到阻礙,從而導致效應功能降低。在最近的一項研究中,研究人員利用FluoroSpot檢測法評估了CAR-T細胞的效力。該檢測法能夠在單細胞水平上檢測各種細胞因子組合,從而間接評估特定CAR-T細胞產品中的T細胞耗竭水平。
CAR-T細胞治療后復發的持續性對這些療法提出了重大挑戰。因此,迫切需要更好地了解CAR-T治療部分療效的機制,確定與持久反應相關的生物標志物或分泌譜,并相應地優化CAR-T產品的效力。除了考慮輸注CAR-T細胞的表型和數量外,評估這些細胞在輸注時的功能(分泌)屬性至關重要。

使用CD19包被的磁珠刺激CAR-T細胞產品,以通過三色FluoroSpot評估最佳的分析物分泌譜
在利用FluoroSpot檢測法評估CAR-T細胞的效力的研究中,Atanackovic等人利用FluoroSpot在單細胞水平上評估CAR-T細胞產品的功能動態,從而將數量評估與其功能特征相結合。在測試的細胞因子組合中,IFN-γ/顆粒酶B/TNF-α(貨號FSP-013609-2, FluoroSpot Plus: Human IFNγ/Granzyme B/TNF-α)被證明是表征臨床級CD19靶向CAR-T細胞產品最相關的組合。在檢測中,Th2細胞因子如IL-4、IL-5和IL-10則明顯稀缺。由于IFN-γ與抗腫瘤細胞毒性結果相關,傳統上一直用于ELISpot檢測法以評估腫瘤特異性T細胞反應。但在該研究中,細胞毒性顆粒酶B和促炎性TNF-α可以與IFN-γ結合用于評估CAR-T細胞的功能。這是因為與ELISpot不同,FluoroSpot能夠評估多功能性,即同時分泌多種分析物的細胞。

以CD19包被的磁珠作為相關靶標、以重組BCMA包被的磁珠作為無關靶標或不加磁珠,對CD19靶向的CAR-T細胞進行刺激。以抗CD3/抗CD28抗體包被的磁珠作為陽性對照。采用FluoroSpot檢測法檢測IFN-γ、顆粒酶B和TNF-α的分泌情況,作為檢測結果的讀出指標。
使用FluoroSpot作為CAR-T產品評估效力檢測法的四個方法學優勢:
1. 基于抗原特異性T細胞在接觸靶抗原后分泌細胞因子,而不是它們表達CAR,來定量這些細胞。
2. 該方法允許在單細胞水平上識別功能相關的CAR-T細胞。
3. 通過FluoroSpot檢測到的T細胞的臨床相關性進一步增加,因為它們是通過主動分泌效應細胞因子被檢測到的,而不是像在細胞內細胞因子染色和流式細胞術中看到的那樣僅僅是產生。
4. FluoroSpot檢測法成本效益高,操作簡單,穩健,而且可以在一夜之間完成,從而能夠快速將產品提供給患者。
Mabtech作為FluoroSpot研究專家,可以提供多種FluoroSpot試劑盒,助力多細胞因子檢測,是CAR-T細胞功能評估的重要工具:
貨號 | 名稱 | 用途 |
FluoroSpot Plus: Human IFN-γ/IL-2 | 該FluoroSpot Plus試劑盒旨在通過FluoroSpot檢測法計數分泌人IFN-γ和IL-2的細胞。 | |
FSP-010209-2 | FluoroSpot Plus: Human IFN-γ/IL-2/TNF-α | 該FluoroSpot Plus試劑盒旨在通過FluoroSpot檢測法計數分泌人IFN-γ、IL-2和TNF-α的細胞。 |
FSP-010209-TD-2 | FluoroSpot Path: Human immune monitoring (3-color) | 該FluoroSpot Path試劑盒旨在通過FluoroSpot檢測法計數分泌人IFN-γ、IL-2和TNF-α的細胞,是疫苗研究、免疫療法評估和傳染病研究中監測免疫反應的完美解決方案。 |
FSP-010308-2 | FluoroSpot Plus: Human IFN-γ/IL-17A/IL-5 | 該FluoroSpot Plus試劑盒旨在通過FluoroSpot檢測法計數分泌人IFN-γ、IL-17A和IL-5的細胞。 |
FSP-0104-2 | FluoroSpot Plus: Human IFN-γ/IL-13 | 該FluoroSpot Plus試劑盒旨在通過FluoroSpot檢測法計數分泌人IFN-γ和IL-13的細胞。 |
FSP-0107-2 | FluoroSpot Plus: Human IFN-γ/IL-10 | 該FluoroSpot Plus試劑盒旨在通過FluoroSpot檢測法計數分泌人IFN-γ和IL-10的細胞。 |
FSP-010702-2 | FluoroSpot Plus: Human IFN-γ/IL-10/IL-2 | 該FluoroSpot Plus試劑盒旨在通過FluoroSpot檢測法計數分泌人IFN-γ、IL-10和IL-2的細胞。 |
FSP-010703-2 | FluoroSpot Plus: Human IFN-γ/IL-10/IL-17A | 該FluoroSpot Plus試劑盒旨在通過FluoroSpot檢測法計數分泌人IFN-γ、IL-10和IL-17A的細胞。 |
FSP-010708-2 | FluoroSpot Plus: Human IFN-γ/IL-10/IL-5 | 該FluoroSpot Plus試劑盒旨在通過FluoroSpot檢測法計數分泌人IFN-γ、IL-10和IL-5的細胞。 |
FSP-010736-2 | FluoroSpot Plus: Human IFN-γ/IL-10/Granzyme B | 該FluoroSpot Plus試劑盒旨在通過FluoroSpot檢測法計數分泌人IFN-γ、IL-10和顆粒酶B的細胞。 |
FSP-0108-2 | FluoroSpot Plus: Human IFN-γ/IL-5 | 該FluoroSpot Plus試劑盒旨在通過FluoroSpot檢測法計數分泌人IFN-γ和IL-5的細胞。 |
FSP-010809-2 | FluoroSpot Plus: Human IFN-γ/IL-5/TNF-α | 該FluoroSpot Plus試劑盒旨在通過FluoroSpot檢測法計數分泌人IFN-γ、IL-5和TNF-α的細胞。 |
FSP-0109-2 | FluoroSpot Plus: Human IFN-γ/TNF-α | 該FluoroSpot Plus試劑盒旨在通過FluoroSpot檢測法計數分泌人IFN-γ和TNF-α的細胞。 |
FSP-0116-2 | FluoroSpot Plus: Human IFN-γ/IL-4 | 該FluoroSpot Plus試劑盒旨在通過FluoroSpot檢測法計數分泌人IFN-γ和IL-4的細胞。 |
FSP-011608-2 | FluoroSpot Plus: Human IFN-γ/IL-4/IL-5 | 該FluoroSpot Plus試劑盒旨在通過FluoroSpot檢測法計數分泌人IFN-γ、IL-4和IL-5的細胞。 |
FSP-011609-2 | FluoroSpot Plus: Human IFN-γ/IL-4/TNF-α | 該FluoroSpot Plus試劑盒旨在通過FluoroSpot檢測法計數分泌人IFN-γ、IL-4和TNF-α的細胞。 |
FSP-011803-2 | FluoroSpot Plus: Human IFN-γ/IL-22/IL-17A | 該FluoroSpot Plus試劑盒旨在通過FluoroSpot檢測法計數分泌人IFN-γ、IL-22和IL-17A的細胞。 |
FSP-0136-2 | FluoroSpot Plus: Human IFN-γ/Granzyme B | 該FluoroSpot Plus試劑盒旨在通過FluoroSpot檢測法計數分泌人IFN-γ和顆粒酶B的細胞。 |
FSP-013602-2 | FluoroSpot Plus: Human IFN-γ/Granzyme B/IL-2 | 該FluoroSpot Plus試劑盒旨在通過FluoroSpot檢測法計數分泌人IFN-γ、顆粒酶B和IL-2的細胞。 |
FSP-013609-2 | FluoroSpot Plus: Human IFN-γ/Granzyme B/TNF-α | 該FluoroSpot Plus試劑盒旨在通過FluoroSpot檢測法計數分泌人IFN-γ、顆粒酶B和TNF-α的細胞。 |
FSP-013609-TD-2 | FluoroSpot Path: Human immunotherapy potency (3-color) | 該FluoroSpot Path試劑盒旨在通過FluoroSpot檢測法計數分泌人IFN-γ、顆粒酶B和TNF-α的細胞。是細胞治療產品效力檢測和作用機制評估的正交方法。 |
FSP-121309-2 | FluoroSpot Plus: Human IL-1β/IL-6/TNF-α | 該FluoroSpot Plus試劑盒旨在通過FluoroSpot檢測法計數分泌人IL-1β、IL-6和TNF-α的細胞。 |
FSP-13121509-2 | FluoroSpot Plus: Human IL-6/IL-1β/GM-CSF/TNF-α | 該FluoroSpot Plus試劑盒旨在通過FluoroSpot檢測法計數分泌人IL-6、IL-1β、GM-CSF和TNF-α的細胞。 |
FSP-18010703-2 | FluoroSpot Plus: Human IL-22/IFN-γ/IL-10/IL-17A | 該FluoroSpot Plus試劑盒旨在通過FluoroSpot檢測法計數分泌人IL-22、IFN-γ、IL-10和IL-17A的細胞。 |
FSP-18010803-2 | FluoroSpot Plus: Human IL-22/IFN-γ/IL-5/IL-17A | 該FluoroSpot Plus試劑盒旨在通過FluoroSpot檢測法計數分泌人IL-22、IFN-γ、IL-5和IL-17A的細胞。 |
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