SBI：細胞系及外泌體

外泌體是大多數細胞類型在體內和體外分泌的直徑為 60 - 180 nm 的膜性囊泡，包含的 RNA 和蛋白質亞群因分泌細胞類型而異，因此在生物標志物發現和功能表征方面具有重要作用。外泌體作為納米級載體，可將信號 RNA、脂質和蛋白質轉運至其他細胞。研究外泌體內容物因而被稱為獲取生物標志物的 “液體活檢”，有助于了解其在疾病發生發展中的作用。

外泌體與癌癥

腫瘤分泌的外泌體含有完整且具有功能的 mRNA、小 RNA 和蛋白質，可改變細胞環境以促進腫瘤生長。腫瘤轉移涉及操縱腫瘤微環境，以在局部和遠處部位優化生存和生長條件。通過外泌體介導的細胞間通訊，為腫瘤細胞的遠程植入準備好潛在位置，從而在實際轉移發生前完成預處理。SBI 已從多種體外培養的人類癌癥模型細胞系中純化外泌體，以加速對其信號內容物的研究以及這些腫瘤外泌體的功能研究。

研究亮點：

* 高度純化的外泌體標準品

* 用于蛋白質和 RNA 貨物研究

* 來自多種模型細胞系的人類癌癥外泌體

* 來自骨髓和前脂肪細胞的人類間充質干細胞外泌體

* 用于構建遞送載體的小鼠樹突狀細胞外泌體

干細胞和樹突狀細胞外泌體：

間充質干細胞（MSCs）是再生醫學的首選干細胞類型，其外泌體已被證明可促進組織損傷修復并減少炎癥反應。人們對探索 MSC 外泌體貨物以及改造它們以用于潛在治療應用非常感興趣。SBI 提供從人類骨髓和前脂肪細胞的 MSCs 中提取的高度純化的外泌體，以推動相關研究發展。對于動物模型研究，還提供小鼠骨髓來源的未成熟樹突狀細胞系外泌體。這些外泌體在轉染外源 RNA 后可被改造為體內遞送載體，甚至可用于將一些藥物遞送至靶細胞。

·在外泌體缺失的FBS中生長的細胞系（Exo-FBS）

·使用ExoQuick-TC純化外泌體

·具有NanoSight的尺寸和完整性

·CD63 Western blot分析驗證

·外泌體提供：>1x10^6外泌體（50 ug蛋白）

細胞系及外泌體信息：

純化外泌體的 CD63 驗證 

通過西方印跡法對純化外泌體進行 CD63 驗證。

從細胞系和人類血清中提取的純化外泌體樣本用 RIPA 緩沖液裂解，制備外泌體蛋白裂解液。每份樣本取約 20 μg 蛋白質，通過梯度 SDS-PAGE 分離后轉移到硝酸纖維素膜上。使用 SBI 的抗 CD63 抗體（貨號 EXOAB-CD63A-1）以 1:1000 的稀釋比例檢測 CD63 表達。利用辣根過氧化物酶標記的二抗以 1:10000 的比例檢測，并成像分析。所有純化的外泌體樣本均呈 CD63 陽性，表現出與已發表的外泌體 CD63 圖譜相符的可變條帶模式。

純化外泌體的完整性

取約 5 uL 純化外泌體樣本，加入 995 μL 經 0.2 μm 過濾的 1×PBS（1:200 稀釋）。將稀釋后的樣本置于設置為 33°C 的 VWR 500 型超聲波水浴中孵育 10 分鐘，以確保充分分散外泌體顆粒。然后將樣本稀釋 1:10 并以 2.5k 的速度渦旋 10 秒。最終 1:2000 稀釋的樣本用于每份樣本分析，以收集 1000 - 3000 條顆粒軌跡。將樣本注入 NanoSight LM10HSB，設置注射泵參數，將相機靈敏度設為自動 16（最靈敏的自動設置）。所有數據均重復三次采集。純化的外泌體顯示出預期的粒徑分布特征，峰值直徑在 90 - 110 nm 之間，濃度約為 1×10?? 個外泌體 / mL，符合培養基外泌體的預期范圍。

純化外泌體的納米顆粒跟蹤分析數據示例

對純化外泌體進行 NanoSight NTA 樣本數據分析，包括 MCF-7 外泌體、MDA-MB-231 外泌體、PC-3 外泌體、A549 外泌體、PCS-500-011 外泌體、HEK293 外泌體等樣本。

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