Biogradetech：DNA損傷檢測試劑盒

DNA存儲著生物體賴以生存和繁衍的遺傳信息，因此維護DNA分子的完整性對細胞至關緊要。然而，在生命活動中，DNA時刻遭受著內源性（氧化自由基、復制叉崩塌等）或外源性（電離輻射、烷化劑等）刺激，DNA損傷不可避免。

 DNA損傷是復制過程中發生的DNA核苷酸序列永久性改變，并導致遺傳特征改變的現象。當各種內外源DNA損傷因子誘發細胞DNA鏈斷裂時，DNA的超螺旋結構受到破壞，在細胞裂解液作用下，細胞膜、核膜等膜結構受到破壞，細胞內的蛋白質、RNA以及其它成分均擴散到細胞裂解液中。DNA損傷后將會導致遺傳特征改變，基因功能喪失等現象。在疾病機制研究中，針對DNA損傷的檢測也是必不可少的。但都有什么方法可檢測細胞DNA損傷呢？

檢測DNA損傷的方法有很多，根據其原理大致可以分為3類：基于損傷DNA理化性質的改變檢測DNA損傷、基于分子雜交檢測DNA損傷以及基于DNA損傷后形成的產物檢測DNA損傷。前兩種方法是基于熒光標記直接觀測DNA的損傷情況，而基于DNA損傷后形成的產物檢測DNA損傷是通過標記物的檢測間接反映DNA的損傷程度。

一、彗星實驗—基于損傷DNA理化性質的改變檢測DNA損傷

彗星實驗（Comet assay）也被稱為單細胞凝膠電泳實驗（Single cell gel electrophoresis，SCGE），是一種在單細胞水平上檢測DNA損傷的技術。當各種內源性和外源性 DNA 損傷因子誘發細胞 DNA 鏈斷裂時，其超螺旋結構受到破壞，在細胞裂解液作用下，細胞膜、核膜等膜結構受到破壞，細胞內的蛋白質、RNA 以及其他成分均擴散到電解液中，而核DNA由于分子量太大不能進入凝膠而留在原位。電泳過程中，如果DNA沒有損傷，則將停留在原位，染色后呈圓形的熒光團，無拖尾出現。如果DNA受損，斷裂的碎片進入到凝膠中，在電場的作用下，DNA碎片離開原位向陽極遷移，形成拖尾。DNA受損越嚴重，斷裂越多，產生的碎片就越多、越小，則向陽極遷移的DNA碎片量就越多，遷移距離也越長，熒光染色后就能看見“彗星”樣尾長并且熒光強度增強。

這種方法檢測結果可信度較高，且能夠在成品試劑盒的選擇下得出漂亮的結果圖片。該種方法的優點是具有高靈敏性，研究的細胞不需處于有絲分裂期。同時，這種技術只需要少量細胞。

二、TUNEL檢測—基于DNA損傷后形成的產物檢測DNA損傷

原位末端標記法（TdT-mediated dUTP nick end labeling，TUNEL）是一種檢測凋亡細胞DNA鏈斷裂片段的方法。細胞凋亡發生時，內源性核酸內切酶將DNA降解成片段，在脫氧核苷酸末端轉移酶的作用下，底物dUTP 或BrDU(無或有熒光標記)可連接到DNA斷片的3-OH末端，采用熒光顯微鏡對標記物進行分析，可以特異精準的定位出正在凋亡的細胞，實現在單細胞水平檢測凋亡細胞的DNA碎片。

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