Biogradetech：泛素化

關于泛素蛋白修飾

靶蛋白的多聚泛素化是調節蛋白酶體介導降解的成熟機制，這種重要的翻譯后修飾(PTM)的失調已被證明可以促進疾病進展。現在人們認識到，多聚和單聚泛素化可以控制關鍵蛋白質功能，如蛋白質-蛋白質相互作用、空間調節和與其他PTMs的串擾。蛋白質組學研究表明，數千種蛋白質受泛素化調節；然而，研究靶蛋白內源性泛素化的工具并不容易獲得。許多研究目標蛋白泛素化是使用Ub和蛋白過表達系統進行的。雖然這些數據顯然很重要，并且可以提供關鍵信息，如位點特異性，但Ub過表達也可以掩蓋生理變化。Biogradetech 開發了一系列的產品，用于泛素化的相關研究。

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一、泛素化蛋白快速富集純化磁珠

基于已知具有泛素親和力的蛋白結構域，串聯泛素已被開發用于分離和鑒定泛素化蛋白。在單個泛素結合相關結構域(UBA)上，泛素蛋白親和磁珠對多泛素基團的親和力增加了1000倍。此外，泛素蛋白親和磁珠對多泛素化蛋白具有保護作用，允許在相對較低的豐度下檢測。這些特性有效地“捕獲”了處于多泛素化狀態的蛋白質。泛素蛋白親和磁珠可用于從細胞和組織提取物中分離、富集和鑒定泛素化蛋白。

常見用途：

1.從細胞系，組織，器官中Pull down多聚泛素化蛋白

2.多聚泛素化蛋白深度富集純化與分離（蛋白質組研究）

3.保護多聚泛素化蛋白，免于被去泛素化（DUB，去泛素化酶）

二、泛素化蛋白檢測——WB檢測

從任何給定的細胞或組織裂解液中分離和富集修飾蛋白。然后使用針對目標蛋白的一抗，通過標準的western blot程序分析富集蛋白群。

a. 研究瞬時調節機制；

b. 測量多個通路成員蛋白的信號通路；

c. 探索一種可能的蛋白修飾；

三、總泛素化蛋白/泛素化靶蛋白的定量方法—ELISA檢測

Ubiquitin protein/Ubiquitin target protein ELISA quantitative Assay是一種夾心測定法，可用于細胞裂解液中泛素/泛素靶蛋白的絕對測量。這種基于平板的測定依賴于使用專有的泛素結合試劑捕獲總泛素/泛素靶蛋白。

1.使用抗泛素抗體準確定量總泛素(單泛素和多泛素)。

2.濃度結果以?g/mL為單位，而不是任意單位。

四、泛素抗體

五、泛素酶