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品牌專題丙型肝炎病毒（HCV）屬于黃病毒科（Flaviviridae），HCV基因組為9.6 kb的正鏈RNA，編碼一個長約3000個氨基酸的多聚蛋白前體。該多聚蛋白在翻譯過程中通過宿主細胞和病毒蛋白酶的蛋白水解作用被加工成至少10種獨立的蛋白質，包括4種結構蛋白（C、E1、E2和p7）和6種非結構（NS）蛋白（NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A和NS5B）。NS3蛋白是一種多功能蛋白，其N端三分之一為絲氨酸蛋白酶結構域，C端三分之二為解旋酶結構域。NS3-4A絲氨酸蛋白酶是由兩種HCV編碼蛋白形成的非共價異二聚體復合物，即NS3的N端絲氨酸蛋白酶結構域（催化亞單位）和NS4A輔助因子（激活亞單位）。NS3-4A絲氨酸蛋白酶負責HCV多聚蛋白前體在四個連接位點的蛋白水解切割：NS3/NS4A（自身切割）、NS4A/NS4B、NS4B/NS5A和NS5A/NS5B。由于這些切割過程對于病毒蛋白的成熟至關重要，因此抑制NS3/4A蛋白酶被認為是開發高效抗HCV藥物的重要靶點之一。
SensoLyte 520 HCV蛋白酶檢測試劑盒（貨號AS-71145）可用于高通量篩選HCV NS3/4A蛋白酶抑制劑，并通過5-FAM/QXL?520熒光共振能量轉移（FRET）肽定量檢測HCV NS3/4A蛋白酶活性。這種FRET肽的序列源自NS4A/NS4B的切割位點。在FRET肽中，5-FAM的熒光被QXL?520猝滅。當被HCV NS3/4A蛋白酶切割成兩個獨立片段時，5-FAM的熒光得以恢復，并可在激發波長/發射波長為490 nm/520 nm處進行監測。由于具有更高的熒光量子產率和更長的波長，5-FAM的信號受細胞成分和測試化合物自身熒光的干擾較小。該檢測方法能夠檢測到低至1.56 ng/mL的活性HCV NS3/4A蛋白酶。
貨號 | |
名稱 | SensoLyte520 HCV Protease Assay HCV 蛋白酶檢測試劑盒 |
應用 | 1. 生物樣品中HCV NS3/4A蛋白酶活性測定； 2. 使用純化的HCV NS3/4A蛋白酶篩選蛋白酶抑制劑； |
除了可提供高質量的HCV NS3/4A蛋白酶分析試劑盒，AnaSpec還可以提供HCV NS3/4A蛋白酶抑制劑，HCV NS3/4A蛋白酶底物等：
貨號 | 名稱 | 應用 |
AS-60798 | HCV NS3/4A Protease Substrate HCV NS3/4A蛋白酶底物 | 一種檢測丙型肝炎病毒NS3/4A蛋白酶活性的高靈敏度FRET底物。檢測HCV NS3/4A蛋白酶< 0.1pmol。裂解后，可以在Abs/Em = 490/512 nm處監測熒光。 |
AS-22991 | HCV Protease FRET Substrate HCV蛋白酶FRET底物 | 廣泛用于NS3蛋白酶活性的連續檢測。底物的切割與酶濃度成正比，NS3的檢測限在1 nM到250 pM之間。在該底物被切割后，可以在吸收/發射波長為355/500 nm處監測熒光。 |
AS-25346 | HCV NS3 Protease Inhibitor 2 HCV NS3蛋白酶抑制劑2 | 一種強效的丙型肝炎病毒NS3蛋白酶肽抑制劑。 |
AS-71126 | SensoLyte490 HCV Protease Assay kit HCV 蛋白酶檢測試劑盒 | 可用于高通量篩選HCV NS3/4A蛋白酶抑制劑，并通過熒光共振能量轉移（FRET）肽連續定量檢測HCV NS3/4A蛋白酶活性。這種FRET肽的序列源自NS4A/NS4B的切割位點。在自然切割位點上的半胱氨酸被氨基丁酸（Abu）取代，且可切割的酰胺鍵被酯鍵取代。這些修飾使kcat/Km值提高了100倍以上，并能夠檢測到亞納摩爾濃度的NS3/4A蛋白酶活性。在FRET肽中，EDANS的熒光被DABCYL猝滅。當HCV NS3/4A蛋白酶在Abu-Ala位點將肽切割成兩個獨立片段時，EDANS的熒光得以恢復，并可在激發波長/發射波長為340 nm/490 nm處進行監測。該檢測方法能夠檢測到低至25 ng/mL的活性HCV NS3/4A蛋白酶。 |
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