Biogradetech：升級款血漿/血清外泌體總RNA提取試劑盒（磁珠法）

外泌體（Exosome，Extracellular vesicles，EVs）是一類由細胞釋放到細胞外的小型膜包裹囊泡。它們起源于細胞內部的多種細胞器，如內質網、高爾基體和細胞膜，并通過融合或分泌途徑釋放到細胞外。外泌體的大小通常在30到150納米之間，具有豐富的蛋白質、核酸和脂質組成。

外泌體在細胞間的通訊和信號傳遞中起著重要作用。它們可以通過包裹和保護其內部的生物活性分子，如小RNA、mRNA、蛋白質和代謝產物，將這些分子傳遞到目標細胞。這種傳遞方式可以影響目標細胞的基因表達、蛋白質合成和細胞功能。因此，外泌體被認為是一種重要的細胞間通訊介質，參與了多種生理和病理過程，包括免疫調節、細胞增殖和凋亡、腫瘤轉移和神經系統功能。

外泌體RNA在細胞生物學中具有重要的生物學意義。以下是外泌體RNA的幾個主要生物學意義：

細胞間通訊：外泌體RNA可以通過外泌體的釋放和攝取，在細胞間進行信息傳遞和通訊。外泌體中的RNA分子，如微RNA（miRNA）、mRNA和長非編碼RNA（lncRNA），可以被目標細胞攝取，并調節目標細胞的基因表達和功能。這種方式可以影響細胞的生理狀態、細胞增殖和凋亡、細胞分化和細胞遷移等生物學過程。

疾病診斷和預后評估：外泌體RNA的組成和表達模式在不同疾病的發生和發展中發生變化，因此被廣泛研究作為潛在的生物標志物用于疾病的診斷和預后評估。通過分析外泌體中的特定RNA分子的表達水平或突變情況，可以識別出與疾病相關的特征，并為疾病的早期檢測、分類和治療提供重要信息。

調控基因表達：外泌體RNA可以在目標細胞中調控基因表達。例如，miRNA是一類短RNA分子，可以通過與目標mRNA結合，抑制其翻譯或降解。外泌體中的miRNA可以通過外泌體的攝取傳遞到目標細胞，并調控目標細胞中的基因表達模式。這種調控機制對于細胞的生理調節、疾病的發生和發展具有重要影響。

腫瘤轉移和預后評估：外泌體RNA在腫瘤轉移和預后評估中起著重要作用。腫瘤細胞釋放的外泌體中含有特定的RNA分子，可以通過影響腫瘤微環境、調節腫瘤細胞的增殖和轉移，以及與免疫系統的相互作用等方式，促進腫瘤的生長和轉移。通過分析外泌體中的RNA分子，可以評估腫瘤的侵襲性和預后風險，為腫瘤治療和預后評估提供重要依據。

總之，外泌體RNA在細胞間通訊、疾病診斷、基因表達調控以及腫瘤轉移和預后評估等方面具有重要的生物學意義。它們在細胞生物學和疾病研究中起著關鍵的調節和調控作用，為我們深入理解細胞功能和疾病機制提供了有價值的信息。

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本試劑盒基于自主研發的均相液體磁珠，能特異性捕獲外泌體而不吸附雜質，實現高純度、高回收率外泌體總RNA提取。具有操作簡便、高純度和高回收率等優點，特別適用于血漿、血清等復雜樣本中的外泌體總RNA提取。提取的外泌體RNA可用于反轉錄、RT-PCR、RT-qPCR、RIP、NGS等研究。

試劑盒組分：

自備儀器、試劑與耗材：

高速冷凍離心機

側擺搖床

1.5mL離心管

磁力架、冰盒

氯仿、異丙醇、75%乙醇等

使用方法：

1、樣品預處理

1）去除細胞。4℃，300g，離心 5min，轉移上清到新的離心管；

對無細胞的樣品，可以跳過此步驟。

2）去除細胞及細胞碎片。4℃，2000g，離心 10min，轉移上清到新的離心管；

3）去除大體積顆粒。步驟 2）得到的上清，4℃，14000g，離心 30min，轉移上清到新的離心管。

2、富集外泌體

1）取100μL ExoMag Exosome Beads Plus到1.5mL離心管，置于磁力架上30s，吸棄磁珠保護液；

2）向上述磁珠中加入500μL經預處理后的樣品（如果不足500μL，可用Solution A補足），離心管固定在側擺搖床上，17rpm，室溫旋轉孵育30min；

在某些樣本中，磁珠在結合外泌體過程中，可能會結團，但不影響分離效果，請放心使用。

3）置于磁力架上，靜置30s，棄上清；

4）加入1mL Solution A，上下顛倒混勻，置于磁力架上，靜置30s，棄上清；

5）重復上述步驟4）2次，保留磁珠。

3、外泌體RNA提取

1）向磁珠中，加入1mL Extraction Buffer（主要成分為Trizol，注意防護），冰上靜置5min；

2）加入200μL氯仿，蓋緊管蓋，劇烈振蕩15s，冰上靜置5min；

3）4℃，12000g，離心15min；

離心后，溶液分為三層（從上往下，分別是水相層、中間層、有機相層），RNA存在于水相層中。

4）將水相層轉移至1.5mL Nuclease-free Tubes中，加入等體積異丙醇，上下顛倒混勻，冰上靜置10min；

水相體積約為所加Extraction Buffer體積的60-70%，建議轉移約600μL水相，以防吸到中間層造成DNA污染。

5）4℃，12000g，離心10min，吸棄上清，保留沉淀；

吸棄上清時，用移液器緩慢吸取，最后殘留約50μL，避免吸走RNA沉淀。（在沉淀不明顯時，尤為重要）

6）向沉淀中，加入1mL 75%乙醇，渦旋充分洗滌，并輕彈管底，重懸沉淀；

7）4℃，12000g，離心5min；吸棄上清，保留沉淀；

吸棄上清時，用移液器緩慢吸取，最后殘留少量液體，避免吸走RNA沉淀。（在沉淀不明顯時，尤為重要）

剩余的少量液體可短暫離心，然后用10μL移液器吸出，注意不要吸到沉淀。

8）室溫放置晾干。注意，不要晾的過干，完全干燥會很難溶解，約3min即可；

9）向沉淀中，加入11μL DEPC-treated Water，反復吹打混勻，充分溶解后取少量檢測，其余溶液置于-80℃保存備用。

注意事項：

1）Extraction Buffer中含有苯酚，具有毒性和腐蝕性。如果吸入體內、接觸皮膚、吞食等會引起中毒、灼傷及其他身體傷害。使用時應穿戴防護物，如防護服裝、手套、眼罩、面罩等。如果不小心接觸到眼睛時，應立即用大量的水沖洗并前往醫院治療；

2）RNA提取操作需要在冰上進行；

3）請穿實驗服并佩戴一次性手套操作，避免RNase污染；

4）RNA提取所用到的耗材，都要預防RNase酶污染；所用到的溶液應使用RNase-free water配制；

5）需自備氯仿、異丙醇（新開封或提取RNA專用）、75%乙醇（DEPC處理水配制）、RNase-free water；

6）RNA半衰期比較短，易降解建議抽提后盡快進行續實驗；

7）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

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Biogradetech是全球生命科學和醫藥研發行業關鍵原料與試劑的領先供應商。他們提供廣泛的產品組合，包括細胞生物學、蛋白質組學、分子生物學、免疫學、微生物學、診斷學、生物化學、神經科學、血液分析和高通量藥物篩選等領域的試劑。Biogradetech的產品受到全球生物研究機構和生物制藥公司的高度追捧，他們以高質量、可靠性和服務而聞名。   

Biogradetech成立于2015年，總部位于美國加利福尼亞州，早期以產品技術研發服務起家，逐步發展了廣泛的產品線，并將其商業化銷售，包括蛋白質、抗體、酶、培養基、試劑盒和儀器。其產品均在嚴格的全球標準下生產，Biogradetech還提供專業的技術支持，幫助客戶選擇正確的產品，并正確使用產品。Biogradetech致力于為客戶提供高質量的產品和服務，是那些尋求高質量試劑和可靠結果的人值得信賴的合作伙伴。   

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