Epigentek：DNA甲基化(5-mC) 定量檢測試劑盒

 DNA甲基化研究的建議工作流程

流程概覽

1. 流程從提取高質量樣本開始。提取類型（DNA或核蛋白提?。⑷Q于后續要進行的檢測類型。

2. 在任何DNA甲基化研究的初期，始終建議對樣本進行全局DNA甲基化定量分析。以5-甲基胞嘧啶（5-mC）DNA為例，這是研究最為廣泛的DNA甲基化修飾，基于ELISA的P-1030試劑盒是一個很好的起點。此外，針對其他修飾（包括5-羥甲基胞嘧啶[5-hmC]、5-醛基胞嘧啶[5-fC]和N6-甲基腺苷[m6A]）的類似試劑盒也已推出。

3. 下游檢測包括對相應DNA甲基轉移酶和去甲基化酶的活性/抑制分析。

4. 隨后通過PCR或NGS在位點特異性水平上對甲基化DNA進行更深入的檢測。DNA亞硫酸氫鹽轉化（單堿基）和MeDIP/hMeDIP（多堿基）試劑盒也歸入這一部分。MeDIP/hMeDIP和ELISA試劑盒中包含的針對5-mC和5-hmC修飾的高靈敏度和高特異性抗體也可單獨購買，并已驗證可用于其他應用，包括DNA結合（DB）、免疫熒光（IF）和免疫組化（IHC）。

一．樣本制備

二．DNA甲基化整體水平定量分析 

三．DNA甲基化相關蛋白酶分析試劑盒

四．特定位點DNA甲基化分析-單堿基（亞硫酸氫鹽轉化+PCR/NGS）

重亞硫酸鹽使DNA中未發生甲基化的胞嘧啶脫氨基轉變成尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶保持不變，PCR擴增所需片段,則尿嘧啶全部轉化成胸腺嘧啶，最后,對PCR產物進行測序并且與未經處理的序列比較,判斷是否CpG位點發生甲基化。亞硫酸氫鹽轉化也可以與其他下游應用相結合，包括定量PCR（甲基化特異性PCR），可用于對亞硫酸氫鹽轉化后的DNA進行qPCR檢測。

五．特定位點DNA甲基化分析-多堿基（甲基化DNA免疫沉淀+PCR/NGS）

甲基化DNA免疫沉淀（MeDIP）是一種用于鑒定基因組甲基化區域的技術，涉及甲基化DNA片段的特異性捕獲和富集。