PBL：VeriKine高靈敏度人干擾素β血清ELISA（貨號41415）

人類 I 型干擾素包括多個成員，如 IFN-α (干擾素α)、IFN-β (干擾素β)、IFN-κ (干擾素κ)、IFN-ε (干擾素ε) 和 IFN-ω (干擾素ω) 鏈?。IFN-β 是一種由成纖維細胞產生的細胞因子，在調節免疫反應和防御細菌、病毒和腫瘤等病原體方面起著至關重要的作用?。IFN-β 對 I 型干擾素受體 (IFNAR) 具有高親和力，該受體由 IFN-α 受體 1 (IFNAR1) 和 IFN-α 受體 2 (IFNAR2) 鏈組成?。重組 IFN-β 仍然是治療多發性硬化癥 (MS) 患者的關鍵療法。多發性硬化癥是一種影響中樞神經系統 (CNS) 的自身免疫性疾病，該療法可降低復發頻率?。準確和精確定量 IFN-β 對于進一步了解其在適應性免疫中的作用以及開發針對自身免疫性疾病和其他疾病的新療法具有重要意義。

以干擾素過度產生為特征的疾病

pbl的VeriKine高靈敏度人干擾素β血清ELISA（貨號41415）能夠準確定量復雜生物樣本（包括自身免疫血清、正常血清/血漿和組織培養基 (TCM)）中低至 pg/ml 水平的人 IFN-β。該 ELISA 的檢測范圍為 1.2-150 pg/ml，定量下限 (LLOQ) 為 1.2 pg/ml。IFN-β 與包被在板上的捕獲抗體結合，并通過生物素化的二抗進行檢測，隨后使用與辣根過氧化物酶 (HRP) 偶聯的鏈霉親和素。四甲基聯苯胺 (TMB) 用作底物。

進行了多項研究以評估該試劑盒的穩健性、靈敏度和準確性。

使用方案 A 測量了正常人血清 (NHS)、多發性硬化癥 (MS) 患者血清和人血漿中的 IFN-β 濃度，該方案旨在提高血清樣本中的性能。NHS、MS 患者血清和使用不同抗凝劑（乙二胺四乙酸二鈉、肝素鈉、檸檬酸鈉）的血漿采集自 Bioreclamation (BioIVT) 和科德角臨床研究中心。試劑盒內提供了哺乳動物來源的人 IFN-β 標準品。所有標準品和加標樣本均由哺乳動物細胞表達的 IFN-β1a 組成。

結果

圖 1. 不同基質中的典型標準曲線。 在正常人血清 (NHS)、組織培養基 (TCM) 和標準品稀釋液 (SD) 中制備了人 IFN-β ELISA 標準曲線。上圖顯示了在多個板子上進行的 8 次標準稀釋液和 NHS 中運行的平均值，以及 4 次 TCM 中運行的平均值。誤差線表示平均值的標準偏差。

圖 2. 正常人血清 (NHS) 中的加標回收率。 上圖描繪了使用一個低背景批次的 NHS 在多個板子上進行的 8 次運行的平均值。測試了三個目標 IFN-β 加標水平：高 (100 pg/ml)、中 (20 pg/ml) 和低 (4 pg/ml)。加標濃度根據在標準稀釋液中制備的標準曲線計算得出。IFN-β 的測量準確度在預期值的 +/- 20% 以內。誤差線表示平均值的標準誤。

圖 5. 批次間一致性。 評估了 8 個不同批次的 41415 人 IFN-β 標準品標準曲線，并與最近一批 41415 (L-6966) 進行了比較。過期試劑盒批次（以斜體和星號 (\*) 表示）作為持續穩定性研究的一部分進行了測試。L-6790 和 L-6672 在過期后一年內測試，L-6428 和 L-6530 在過期后一年測試，L-6277 在過期后兩年測試。IFN-β 的檢測準確度在計算平均濃度的 +/- 20% 以內。誤差線表示兩次運行之間的標準偏差。除 150 和 1.17 pg/ml 濃度外，所有濃度均運行兩次。

圖 6. 正常人血清 (NHS) 中的稀釋線性。 使用一個低背景人血清批次制備了 5 份獨立的 80 pg/ml 加標樣本。在標準稀釋液中對加標樣本進行了五次兩倍系列稀釋。加標樣本在 3 個不同的日期進行了測試。不同稀釋度加標樣本的濃度根據標準稀釋液中的標準曲線計算得出。IFN-β 的檢測準確度在預期值的 +/- 20% 以內，但一次運行中的單個稀釋度除外。

圖 7. 多發性硬化癥 (MS) 樣本中的稀釋線性。 在 4 個不同的 IFN-β 陽性血清樣本（來自接受 IFN-β 治療的個體 MS 患者）中測試了檢測的線性。所有樣本先前均經過 IFN-β 檢測。除樣本 6276 (±) 運行了兩次外，所有樣本均在單次實驗中運行。每個血清樣本在標準稀釋液中進行了五次或六次兩倍系列稀釋。IFN-β 的濃度根據標準稀釋液中的標準曲線計算得出。IFN-β 的檢測準確度在標稱值的 +/- 20% 以內。稀釋的標稱濃度基于原液樣本中測得的值。

圖 8. 正常人血清 (NHS) 和多發性硬化癥 (MS) 患者血清中定量到的 IFN-β 水平。 檢測了 43 份 MS 血清樣本和 15 份 NHS 樣本中的 IFN-β。23 名 MS 患者接受 IFN-β 治療，20 名接受其他療法。在接受 IFN-β 治療的 23 名 MS 患者中，2 名使用 Betaseron (Beta 1b)，其余 21 名使用 Rebif 和 Avonex (Beta 1a)。在接受 IFN-β 治療的 MS 患者中，87% 的患者可定量檢測到 IFN-β，而在接受其他療法的患者中，這一比例為 5%。所有低于 LLOQ 的樣本在圖中均以 1.0 pg/ml 的水平標繪。

總結

PBL 的VeriKine高靈敏度人干擾素β血清ELISA（貨號41415）在自身免疫血清、正常血清、組織培養基（補充有 10% FBS 的 DMEM）以及含有抗凝劑乙二胺四乙酸二鈉、肝素鈉或檸檬酸鈉的血漿中表現良好。該 ELISA 可準確定量自身免疫血清中低至約 1.2 pg/ml 的 IFN-β 1a。在生物分析研究中，可以評估這些基質中未知濃度的 IFN-β（在檢測范圍內）。

對舊批次和近期批次試劑盒的重復測試揭示了該 ELISA 的穩健性、靈敏度以及批次間的一致性。

可溶性 IFNAR2 (sIFNAR2) 不影響 IFN-β 的檢測。41415 ELISA 似乎能夠檢測血清中與 sIFNAR2 結合的 IFN-β 以及游離的 IFN-β。

一項持續進行的穩定性研究表明，人 IFN-β 標準品隨時間保持穩定，可用于多個批次中準確測量 IFN-β。

人 IFN-β ELISA 在正常人血清 (NHS) 和自身免疫血清（如來自 MS 患者的血清）中均表現出良好的稀釋線性性能。該檢測在復雜基質中的多個稀釋水平上提供精確的結果。

參考文獻

1. Piehler, J., Thomas, C., Garcia, K. C., & Schreiber, G. (2012). Structural and dynamic determinants of type I interferon receptor assembly and their functional interpretation. Immunological reviews, 250(1), 317-34.

2. Hunt, M. & Hunt, R. (2018). Interferon. [online] Available at: http://www.microbiologybook.org/mhunt/interferon.htm.

3. Kasper, L. and Reder, A. (2014). Immunomodulatory activity of interferon-beta. Annals of Clinical and Translational Neurology, 1(8), pp.622-631.