Biotium：活死細菌染色試劑盒

前情回顧：Biotium：微生物(細菌，真菌&酵母)熒光染色及活力檢測全套工具 

產品描述：

Biotium的Viability/Cytotoxicity Assay Kit for Bacteria Live & Dead Cells(30027)通過兩個DNA探針DMAO和EthD-III對活細菌(綠色)和死細菌(紅色)進行雙色熒光染色。DMAO 是一種綠色熒光核酸染料，可對活細菌和死細菌進行染色。Ethidium Homodimer III (EthD-III) 是一種紅色熒光核酸染料，可選擇性地對細胞膜受損的死細菌進行染色。當用 DMAO 和 EthD-III 的混合物染色時，細胞膜完整的細菌會發出綠色熒光，而細胞膜受損的細菌會發出紅色熒光。該試劑盒適用于熒光顯微鏡和流式細胞儀。檢測原理是通用的，適用于大多數細菌類型。用于100次流式細胞檢測或1000次顯微鏡檢測。 

特征：

• 檢測同一細胞群中的活細胞和死細胞

• 簡單、快速的免洗染色

• 用于熒光顯微鏡或流式細胞術

產品推薦：

DMAO，5 mM 溶液(2 x 100 uL) 

EthD-III，2 mM 溶液(2 x 150 uL)  

1、儲存和處理在4℃下避光儲存，按推薦儲存條件，產品的穩定期限至少為收到日期后的2年。DMAO和EthD-III染料與核酸結合。

2、光譜特性DMAO：Ex/Em：503/530nm（與DNA共存時） 乙溴化二聚體III（EthD-III）：Ex/Em：532/625nm*（與DNA共存時） *EthD-III在279nm處也有強烈的紫外吸收峰

3、分析方案

1）熒光顯微鏡染色方案

• 將染料儲備溶液加熱至室溫，并振蕩混合。

• 通過將1微升DMAO、2微升EthD-III和8微升150毫摩爾氯化鈉（參見分析注意事項＃2）組合，制備100倍濃度的染色溶液。振蕩以確保充分混合。 注意：根據需要，體積可以按比例調整。

• 在微離心管中，通過以10,000 x g離心5分鐘并去除上清液來收集細菌細胞。

• 可選：用150毫摩爾氯化鈉洗滌細胞一次，通過上下移液數次。

• 通過以10,000 x g離心5分鐘并去除上清液來沉淀細菌細胞。

• 在150微摩爾氯化鈉中重新懸浮細胞100微升。

• 向100微升細菌懸浮液中加入1微升染料混合物。

• 輕輕混合，并在避光條件下室溫孵育15分鐘。

• 將樣品中的5微升轉移到玻片上，涂上玻璃蓋片，并用CoverGrip Coverslip Sealant（23005）或指甲油密封。

• 通過熒光顯微鏡對標記的細胞進行成像。DMAO可以使用FITC濾光片組進行成像，EthD-III可以使用Texas Red?或Cy?3濾光片組進行成像。

2）流式細胞術染色方案

①. 按照上述熒光顯微鏡染色方案的步驟①-⑧進行操作。 

注意：我們建議還制備僅用DMAO染色的死細胞和僅用EthD-III染色的死細胞的單染細菌樣品。 

②. 加入0.5ml流式細胞術分析中的常用緩沖液。 

③. 進行流式細胞術分析，檢測FITC通道中的DMAO，以及PE或PE-Texas Red?通道中的EthD-III。