Echelon Biosciences：PIP脂質蛋白結合芯片PIP Array

通過前期PIP Strips篩選，我們可以確定目標蛋白與8種磷酸肌醇及其它7種重要磷脂是否存現結合。如果目標蛋白與8種磷酸肌醇存在結合，如何進一步檢測其結合強度或者結合靈敏度呢?

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PIP Array – Lipid-Protein Interaction Assay

PIP Array是一種4 x 5 cm的疏水膜，包含8種磷酸肌醇，提供7種含量的標準品：100, 50, 25, 12.5, 6.25, 3.13, 1.56 pmol。通過一個簡單的蛋白質-脂質覆蓋實驗來確定脂質-蛋白質之間的相互作用強度和靈敏度。

*** 該PIP脂質蛋白結合芯片產品僅用于科研實驗.

• PIP Array，PIP脂質蛋白結合芯片斑點分布：

*膜的左上角有一個對角線切口，Ponceau S染色（粉紅色）被添加到脂質點上，以幫助定位。陣列的方向，脂質的位置見上面的模板。所有的脂質都是長鏈（diC16）的高純度合成物。

• PIP Array, Nature/Cell文章鑒賞：

①Nature文章：Tan, Shutang et al. "The lipid code-dependent phosphoswitch PDK1-D6PK activates PIN-mediated auxin efflux in Arabidopsis". Nature plants vol. 6,5 (2020): 556-569. doi:10.1038/s41477-020-0648-9.

【摘要】植物激素生長素通過極性運輸在體內呈現不對稱分布，參與了不同生長發育過程的調控，生長素的分布還被環境信號所調控，介導植物向性生長等。生長素輸出載體PIN (PIN-FORMED) 家族蛋白調控了生長素分布，參與多種生理活動的調節。研究表明PIN蛋白定位及活性受到囊泡運輸等調節，同時還存在蛋白磷酸化等翻譯后修飾， AGC家族成員PINOID、D6PK和PAX等通過磷酸化PIN調控其極性定位或活性，盡管生化分析表明PDK1可以磷酸化PINIOD，但其是否參與PIN介導的生長素極性運輸仍不清楚。細胞學觀察表明，PDK1.1和PDK1.2定位于細胞質和細胞膜上，在膜上呈現明顯的極性分布。生化分析表明，PDK1.1和PDK1.2可以結合多種不同的磷脂分子，且這種結合對PDK1.1和PDK1.2的極性定位非常重要。

② Cell文章：Wang, Ying Jie et al. "Phosphatidylinositol 4 phosphate regulates targeting of clathrin adaptor AP-1 complexes to the Golgi". Cell vol. 114,3 (2003): 299-310.

doi:10.1016/s0092-8674(03)00603-2

【摘要】磷脂酰肌醇 4 磷酸 [PI(4)P] 對酵母分泌至關重要，但其在哺乳動物細胞中的作用尚不清楚。當前的范式提出 PI(4)P 主要作為磷脂酰肌醇 4,5 二磷酸 (PIP2) 的前體，這是一種重要的質膜調節劑。我們發現 PI(4)P 在哺乳動物高爾基體中富含，并使用 PI4KIIalpha（一種高爾基體磷脂酰肌醇 4 激酶）的 RNA 干擾 (RNAi) 來確定 PI(4)P 是否直接調節高爾基體。 PI4KIIalpha RNAi 降低高爾基體 PI(4)P，阻止網格蛋白適配器 AP-1 復合物向高爾基體的募集，并抑制依賴于 AP-1 的功能。通過添加回 PI(4)P，可以挽救這種 AP-1 結合缺陷。此外，純化的 AP-1 結合 PI(4)P，抗 PI(4)P 抑制細胞溶質 AP-1 向正常細胞膜的體外募集。我們建議 PI4KIIalpha 通過生成指定 AP-1 外套機械對接的富含 PI(4)P 的域來建立高爾基體獨特的脂質定義的細胞器身份。

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Nature/Cell 已發表文章：

• Tan, Shutang et al. "The lipid code-dependent phosphoswitch PDK1-D6PK activates PIN-mediated auxin efflux in Arabidopsis". Nature plants vol.6,5 (2020): 556-569.

• Li, Xiaoxue et al. "Renal Purge of Hemolymphatic Lipids Prevents the Accumulation of ROS-Induced Inflammatory Oxidized Lipids and Protects Drosophila from Tissue Damage". Immunity vol. 52,2 (2020): 374-387.e6.

• Levin-Konigsberg, Roni, et al. "Phagolysosome resolution requires contacts with the endoplasmic reticulum and phosphatidylinositol-4-phosphate signalling." Nature cell biology 21.10 (2019): 1234-1247.

• Lin, Aifu, et al. "The LINK-A lncRNA interacts with PtdIns (3, 4, 5) P 3 to hyperactivate AKT and confer resistance to AKT inhibitors." Nature cell biology 19.3 (2017): 238-251.

• Islam, Kazi T., et al. "A novel bi-domain plant defensin MtDef5 with potent broad-spectrum antifungal activity binds to multiple phospholipids and forms oligomers." Scientific reports 7.1 (2017): 1-13.

• Wang, Ying Jie et al. "Phosphatidylinositol 4 phosphate regulates targeting of clathrin adaptor AP-1 complexes to the Golgi". Cell vol.114,3 (2003): 299-310.

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